【摘 要】
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目的：为区分PRRSV隐性感染和灭活苗免疫猪群产生的抗体,为猪场PRRSV非结构蛋白抗体检测和流行病学调查提供了一种简便的方法.材料方法：采用限制性内切酶BamHⅠ与HindⅢ对重组质粒pMD18-T-Nsp10/JL双酶切,将目的基因Nsp10连接至原核表达载体pET-32a,构建重组表达载体pET-32a-Nsp10/JL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.结果：SDS-PAGE分析
【机 构】
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贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025 贵州省畜牧兽医研究所,贵州贵阳550002
【出 处】
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2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会
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目的：为区分PRRSV隐性感染和灭活苗免疫猪群产生的抗体,为猪场PRRSV非结构蛋白抗体检测和流行病学调查提供了一种简便的方法.
材料方法：采用限制性内切酶BamHⅠ与HindⅢ对重组质粒pMD18-T-Nsp10/JL双酶切,将目的基因Nsp10连接至原核表达载体pET-32a,构建重组表达载体pET-32a-Nsp10/JL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.
结果：SDS-PAGE分析结果表明，有分子量约为43.4kDa的融合蛋白获得表达，与预期结果相符；Western-Blotting证实该表达蛋白具免疫学活性。表达产物多以包涵体形式存在，将表达蛋白尿素溶解后用含多聚组氨酸标签的蛋白纯化试剂盒纯化，结果显示纯化效果较好，取梯度透析复性的重组蛋白作为包被抗原，建立ELISA方法，结果显示其最佳反应条件是：重组蛋白包被浓度为7.37μg/mL，血清稀释度为1:40，封闭液和血清稀释液以5％脱脂乳为佳，酶标二抗稀释度为1:1000，阴阳性血清临界值为0.32。
结论：猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种急性传染病，临床上表现为母猪流产、早产、产弱死胎仔等繁殖障碍，仔猪呼吸困难、高死亡率和育肥猪呼吸道症状。PRRS广泛存在并流行于世界各主要养猪国家和地区。特别是近几年，PRRS在我国不同地区都存在不同程度的流行，经济损失严重。其病原体猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)含有8个开放阅读框(ORFs)框。其中，Nspl0蛋白是由ORFlb所编码，ElidaM. Bautista等鉴定了Nspl0的生化特性，证实其具有NTP酶和解旋双链RNA的活性。本研究通过序列分析表明，Nspl0蛋白具有较好的保守性和良好的免疫原性，因此可以作为诊断抗原来检测PRRSV。
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