【摘 要】
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目的：观察参元丹后处理对体外心肌细胞I/R模型细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响并探讨其作用机制。 方法：体外培养大鼠乳鼠原代心肌细胞：出生1～3天的Wistar大鼠，取心脏组
【机 构】
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首都医科大学附属北京中医医院 北京 100010
【出 处】
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中华中医药学会心病分会全国第十二次学术年会
论文部分内容阅读
目的：观察参元丹后处理对体外心肌细胞I/R模型细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响并探讨其作用机制。
方法：体外培养大鼠乳鼠原代心肌细胞：出生1～3天的Wistar大鼠，取心脏组织并获取心肌细胞，于37℃、5％CO2、饱和湿度环境培养3～4天。模拟在体心肌急性缺血环境：心肌细胞入培养箱内缺氧小室，通入95％N2+5％~CO2混合气，流速1.5 L·min-1，通气15 min后，将流速调至0.5L·min-1，持续通气2小时，此过程为缺氧。打开缺氧小室，取出培养板，吸出上清液，加入空气饱和10％胎牛血清培养液，继续培养4h，此过程为复氧，建立体外心肌细胞I/R模型。参元丹含药血清：大鼠随机分为2组，分别给予参元丹0.048g·ml-1、1ml·100g-1及等量生理盐水，连续5d，最后一次给药后1h腹主动脉取血并分离血清，造模前将参元丹含药血清及空白血清分别稀释成5％参元丹含药血清、5％空白对照血清作为后处理药物。实验分正常培养组、模型组、空白血清对照组、参元丹含药血清后处理组、参元丹含药血清后处理+LX294002组。形态学和免疫细胞化学方法鉴定心肌细胞;Hoechst33342染色检测心肌细胞的早期凋亡率;免疫细胞法比较各组间Bcl-2及Bax表达情况。
结果：心肌细胞鉴定显示心肌细胞阳性率≥95％，保证了实验的真实性相可靠性。与正常培养组相比，模型组心肌细胞早期凋亡率、Bcl-2及Bax表达均增高(P<0.01)。与对照组及参元丹+LY组相比，参元丹组心肌细胞早期凋亡率、促凋亡基因Bax表达均降低(P<0.01)，抑凋亡基因Bcl-2表达增强(P<0.01)。对照组与参元丹+LY组之间，心肌细胞早期凋亡率、Bcl-2及Bax表达均无明显变化(P>0.05)。
结论：参元丹后处理能够促进体外I/R模型Bcl-2表达，抑制Bax表达，降低心肌细胞早期凋亡率，但这一作用能够被PI3K特异性阻断剂LY294002所阻断，提示参元丹后处理减少再灌注心肌细胞凋亡与PI3K途径有关。
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