【摘 要】
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目的：血清蛋白在特殊生理或病理状态下往往经过剪切、翻译后修饰加工为成熟蛋白发挥生物学功能,但目前的质谱鉴定只能粗略鉴定蛋白,并不能确定蛋白的亚型及剪切片段。使用
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目的：血清蛋白在特殊生理或病理状态下往往经过剪切、翻译后修饰加工为成熟蛋白发挥生物学功能,但目前的质谱鉴定只能粗略鉴定蛋白,并不能确定蛋白的亚型及剪切片段。使用succinimidyloxycarbonylmethyltris(2,4,6-trimethoxyphenyl) phosphonium bromide(TMPP-Ac-OSu)专一地对蛋白质N端进行化学标记,结合质谱分析,在给出蛋白鉴定结果的同时,也确定了蛋白质N端,达到精确鉴定蛋白的目的。方法：以C57BL/6J系孕鼠血清为例,首先利用糖苷酶酶切血清中大分子蛋白的糖链,以便于在双向电泳中分离到目标蛋白,双向电泳分离蛋白,在胶内酶解之前,使用TMPP-Ac-OSu试剂处理样品,经过简单的洗脱步骤,高效地标记蛋白N端,通过LTQ-orbitrap液质联用仪鉴定蛋白。结果：通过常规质谱鉴定的Haptoglobin、pregnancy zone protein蛋白,用我们的方法进一步精确为haptoglobin β-subunit、pregnancy zone protein 35 kDa亚型,并发现了四种蛋白为其理论序列的剪切片段：其中三种是剪切掉信号肽的成熟蛋白,另外一种蛋白complement component 3发现了新的剪切形式。结论：通过在质谱过程中添加几步操作,在质谱鉴定的同时确定蛋白的亚型,有助于确定蛋白亚型及寻找新的剪切形式。
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