【摘 要】
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目的：利用氯喹(chloroquine,CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)及顺铂(Cisplatin,DDP)作用于CAL-27细胞系,探讨抑制自噬对DNA损伤的影响.方法：实验分组为对照组、氯喹组(CQ组)、3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)、顺铂组(DDP组)、氯喹联合顺铂组(CQ+DDP组)及3-甲基腺嘌呤联合顺铂组(DDP组).应用MTT比色法比较药物对口腔癌C
【机 构】
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吉林大学口腔医院病理科,吉林 长春 130021 吉林大学口腔医院病理科,吉林 长春 130021
【出 处】
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2014全国口腔生物医学学术年会暨“西湖国际”口腔医学高峰论坛
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目的：利用氯喹(chloroquine,CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)及顺铂(Cisplatin,DDP)作用于CAL-27细胞系,探讨抑制自噬对DNA损伤的影响.方法：实验分组为对照组、氯喹组(CQ组)、3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)、顺铂组(DDP组)、氯喹联合顺铂组(CQ+DDP组)及3-甲基腺嘌呤联合顺铂组(DDP组).应用MTT比色法比较药物对口腔癌CAL-27细胞增殖作用的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,采用激光共聚焦显微镜观察自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ,DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达,通过Western Blot检测LC3-Ⅱ、γ-H2AX的表达情况.结果：1、细胞增殖活性：对照组、3-MA组、CQ组细胞增殖活性无明显差异(P＞0.05),DDP组、CQ+DDP组及3-MA+DDP组细胞增殖活性均低于对照组、3-MA组、CQ组(P＜0.05),CQ+DDP组及3-MA+DDP组细胞的增殖活性均低于DDP组(P＜0.05).2、细胞凋亡检测结果：对照组、3-MA组、CQ组无明显差异(P＞0.05),DDP组、CQ+DDP组及3-MA+DDP组细胞凋亡率均高于对照组、3-MA组、CQ组(P＜0.05),CQ+DDP组及3-MA+DDP组细胞凋亡率均高于DDP组(P＜0.05).3、激光共聚焦检测结果：(1)自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达的变化：DDP组细胞平均荧光强度高于对照组、CQ组、3-MA组、3-MA+DDP组、CQ+DDP组(P＜0.05),CQ组、3-MA组细胞荧光强度低于对照组(P＜0.05).(2)DNA损伤相关蛋白γ-H2AX表达的变化：DDP组、CQ+DDP组及3-MA+DDP组细胞平均荧光强度均高于对照组、CQ组、3-MA组(P＜0.05),3-MA+DDP组、CQ+DDP组细胞平均荧光强度高于DDP组(P＜0.05).4、Western blot检测结果：1)自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达的变化：DDP组平均灰度值高于对照组、CQ组、3-MA组、3-MA+DDP组、CQ+DDP组(P＜0.05),CQ组、3-MA组平均灰度低于对照组(P＜0.05).2)DNA损伤修复相关蛋白γ-H2AX表达的变化：DDP组、CQ+DDP组及3-MA+DDP组平均灰度值均高于对照组、CQ组、3-MA组(P＜0.05) ,3-MA+DDP组、CQ+DDP组平均灰度值均高于DDP组(P＜0.05).结论：自噬是维持肿瘤细胞稳态的一种生存机制,通过抑制自噬,可见DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达增加,肿瘤细胞凋亡数量增多,增强了顺铂对CAL-27细胞DNA损伤,达到增强顺铂对CAL-27细胞的杀伤作用.因此,自噬有望成为肿瘤临床治疗中的新靶点.
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