CM-DIL和DAPI标记骨髓间充质干细胞的体外体内对比研究

• 作 者: 商青青;李凯;周建业;胡盛寿;
• 机 构: 北京协和医学院,中国医学科学院,国家心血管病中心,阜外心血管病医院&心血管疾病国家重点实验室,北京市西城区北礼士路167号 100037
• 出 处: 第六届全国组织工程与再生医学大会
• 发表日期: 2013年期

目的:从体外实验与体内实验两方面,探讨两种荧光染料CM-DIL与DAPI标记的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)之间的差异.
方法:用贴壁培养法获取、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,CM-DIL与DAPI分别标记第2代BMSCs,未标记细胞为对照组.台盼蓝计数检测BMSCs的活力;MTS法检测BMSCs的增殖能力并绘制增殖曲线;倒置相差荧光显微镜下动态观察标记后1、2、3代BMSCs的阳性标记率及荧光衰减情况.结扎SD大鼠冠状动脉前降支致心肌梗死, 并随机分为2组:CM-DIL组与DAPI组.3天后于心肌梗死边缘处注射标记的细胞,细胞移植后3天取材制备冰冻切片与石蜡切片,在荧光显微镜下观察标记的BMSCs的分布情况.
结果:体外实验中，CM-DIL标记的BMSCs与DAPI标记的BMSCs在细胞活力及增殖能力方面没有统计学差异，但两者的增殖能力均低于对照组;两种染料标记后的第1代细胞的荧光阳性率均为100％，但DAPI标记后的第3代细胞的荧光强度明显减弱。体内实验中，CM-DIL组与DAPI组心肌组织冰冻与石蜡切片均检测到集中分布的荧光;CM-DIL组冰冻切片红色荧光要比DAPI组的蓝色荧光边界清晰并且非特异性背景低;CMVI-DIL组进一步通过含DAPI的封片剂封片排除荧光假阳性。
结论:CM-DIL染料比DAPI更适合对BMSCs进行体外标记与体内示踪。