【摘 要】
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选用20日龄岭南黄羽肉鸡鸡胚在无菌环境下分离腿部骨骼肌,经过剪碎、胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶消化,通过100目和200目筛过滤,滤液转移到10ml离心管中1700rpm离心、清洗得到骨骼肌原代细胞,用计数板计数,根据计数结果将细胞液稀释至5.0×105/mL,然后接种至培养瓶中,用完全培养基在二氧化碳培养箱培养48小时,再经0.25％胰蛋白酶消化传代,采用差速贴壁法得到骨骼肌卫星细胞,以5.0×105/m
【机 构】
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广东省农业科学院动物科学研究所,农业部华南动物营养与饲料重点实验室,广州510640
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选用20日龄岭南黄羽肉鸡鸡胚在无菌环境下分离腿部骨骼肌,经过剪碎、胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶消化,通过100目和200目筛过滤,滤液转移到10ml离心管中1700rpm离心、清洗得到骨骼肌原代细胞,用计数板计数,根据计数结果将细胞液稀释至5.0×105/mL,然后接种至培养瓶中,用完全培养基在二氧化碳培养箱培养48小时,再经0.25％胰蛋白酶消化传代,采用差速贴壁法得到骨骼肌卫星细胞,以5.0×105/mL浓度接种至96孔板和24孔板,试验分5组,各组无血清培养液中分别添加0、12.5、25、50、75和100 μmol/L的异黄酮S(所用异黄酮S为广东省农业科学院畜牧研究所研制产品,纯度为98.5％以上),异黄酮S预先溶解于二甲基亚砜中,并保持各组中二甲基亚砜浓度一致,所有培养液中均添加80μmol/LH2O2/FeSO4进行氧化处理建立氧化模型,每组6个重复(孔),研究了异黄酮S对肉鸡骨骼肌卫星细胞增殖和抗氧化作用的影响,试验观察了骨骼肌卫星细胞经异黄酮S处理后的形态变化和采用MTT法测定骨骼肌卫星细胞的增殖情况,结果表明,在氧化环境中,异黄酮S可减少骨骼肌卫星细胞死亡,而且添加异黄酮S均促进骨骼肌卫星细胞的增殖(p＜0.01),各异黄酮S处理组骨骼肌卫星细胞经MTT染色和SDS处理后的吸光度分别较对照组提高45.90％(p＜0.01)、58.64％(p＜0.01)、60.21％(p＜0.01)、46.42％(p＜0.01)和25.48％(p＜0.05).添加25,50,75和100μmol/L异黄酮S使细胞培养上清液中T-SOD活性分别提高17.02％ (p＜0.01),13.00％ (p＜0.05),13.26％(p＜0.05)和11.89％ (p＜0.05),添加25μmol/L异黄酮S提高GSH-px活性90.68％ (p＜0.05),75和1001μmol/L异黄酮S处理组CAT活性分别比对照组提高49.17％ (p＜0.01)和49.13％(p＜0.05),异黄酮S有提高细胞上清液中T-AOC的趋势(p＞0.05),添加75和100μmol/L异黄酮S处理显著降低细胞CK的分泌(p＜0.05).总之,异黄酮S能促进骨骼肌卫星细胞在氧化环境中的增殖,提高骨骼肌卫星细胞的抗氧化能力.
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