协同型多肽探针的设计及人血清白蛋白亲和相互作用分析

来源 :第十届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whr791154777
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本研究以人血清白蛋白(HSA)为模型蛋白质,选择其表面3个亲水结构域为靶点,基于正义肽一反义肽相互作用原理,进行单点识别的小分子多肽的设计,获得了3条直读反义六肽。通过FMOC固相合成法制备了反义肽,并利用反相高效液相色谱法对粗产品进行了分离纯化,获得了纯度均大于95%的反义肽,用于HSA与反义肽的分子相互作用研究。以甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA)微球作为载体,合成了以HSA为配基的高效亲和填料,构建了HSA高效亲和色谱体系,以考察HSA与3条反义肽的特异性识别能力。与此同时,还利用SPR免标记、实时、高灵敏度的特点,以3条反义肽为识别元件,构建了HSA传感芯片,考察多肽-蛋白质的识别作用。传感信号表明,HSA在3种多肽传感芯片上均呈现快结合、慢解离的动力学行为。通过计算,3条反义肽和HSA的亲和力均达到微摩尔水平,而HSA在对照点芯片上不吸附,显示出特异性的亲和识别能力。将进一步通过设计、优化连接骨架结构,以3条亲和反义肽为基本识别单元,构建多位点识别的协同型多肤探针,尝试用于复杂生物样品中高丰度HSA的去除,为蛋白质组学研究、疾病标志物的发现以及示踪药物运输的研究发展分离分析新方法。
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