酪氨酸蛋白激酶配体ephrinB2蛋白靶向miRNA表达载体构建及其沉默效率评价

• 作 者: 潘佳忻;张锋;吴新民;张志文;
• 机 构: 北京大学医学部北京大学第一医院麻醉科,北京,100034
• 出 处: 第三届北京大学重症医学论坛
• 发表日期: 2011年期

　　目的：针对大鼠的Efnb2基因序列(目的蛋白EphrinB2),构建特异性干扰微小RNA(miRNA)及其表达载体pcDNA"6.2-GW/EmGFPmiR,并检测其对Efnb2基因的干扰作用。
　　方法：根据NM001107328基因序列设计并合成4对miRNA oligo；将4对oligo退火成双链.然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将4对双链miRNA oligo分别插入到miRNA表达载体pcDNATM 6.2-GW/EmGFPmiR中,构建4个miRNA表达质粒,通过脂质体2000将已经构建好的pcDNATM 6.2-GW/EmGFPmiR干扰质粒转染至大鼠嗜铬细胞瘤PCI2细胞中,通过qPCR检测Efnb2基因表达水平的变化.
　　结果：DNA测序分析证明Efnb2基因的miRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明Efnb2基因的表达水平明显降低.
　　结论：成功地构建了针对Efnb2基因的miRNA载体,转染细胞后对Efnb2基因沉默.