【摘 要】
：
本试验通过将玉米赤霉烯酮降解酶基因zhd101基因在大肠杆菌中的表达,以获得大量纯化的重组ZHD101降解酶蛋白.通过人工合成zhd101基因,以质粒pET32a(+)为表达载体,构建zhd101重组质粒,并通过酶切和测序鉴定重组质粒.然后化学转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导转化子,通过SDS-PAGE电泳鉴定zhd101表达水平,采用Novagen公司生产的His.Bind蛋白纯化
【机 构】
：
沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳 110866 四川理工学院化学与制药工程学院,四川 自贡 64
【出 处】
：
辽宁省畜牧兽医学会2015年学术年会
论文部分内容阅读
本试验通过将玉米赤霉烯酮降解酶基因zhd101基因在大肠杆菌中的表达,以获得大量纯化的重组ZHD101降解酶蛋白.通过人工合成zhd101基因,以质粒pET32a(+)为表达载体,构建zhd101重组质粒,并通过酶切和测序鉴定重组质粒.然后化学转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导转化子,通过SDS-PAGE电泳鉴定zhd101表达水平,采用Novagen公司生产的His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化ZHD101蛋白.结果表明,重组质粒pET32a(+)-zhde101经HindⅢ、SacⅠ酶切后,1％琼脂糖凝胶电泳证实zhd101正确插入pET32a(+)载体.重组菌经IPTG诱导后,有分子量大约为47.5KD蛋白表达,与预期的融合蛋白分子量相符,蛋白表达量约占细菌总蛋白量的35％,纯化后的ZHD101蛋白样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为95％左右.成功构建的pET32a(+)-zhd101表达载体能在大肠杆菌BL21(ED3)获得高效表达,大量纯化的ZHD101蛋白为进一步研究和应用奠定了基础.
其他文献
研究了不同树势对15年生早钟6号枇杷枝梢、果实品质、产量效益、叶片矿质元素含量的影响.结果表明：弱树和壮树的枝梢长度、粗度差异均显著；弱树与壮树和中庸树的叶片数差异均极显著，叶片的厚度、干重差异均不显著.弱树、中庸树与壮树的果实单果重、横径、纵径差异均极显著，壮树的单果重是弱树、中庸树的1.29倍和1.23倍；弱树果实中的可溶性固形物(TSS)、可滴定酸和可溶性糖的含量与中庸树势和壮树相比，没有明
为阐明温度对枇杷花粉原位萌发、花粉管生长和胚囊寿命的影响,明确枇杷花粉萌发、花粉管生长的最适温度,为枇杷花期管理及生态区划提供新的科学依据.以大五星为试材,将其离体花枝置于不同温度的恒温箱中进行培养,用龙泉5号进行异花授粉,授粉后不同时间段分别采集花朵,采用荧光显微观察方法观察统计花粉萌发和花粉管生长和胚囊活力情况.结果表明,在10.0、15.0和20.0℃的温度条件下花粉萌发率、被花粉管生长穿过
本义以丽水红肉、黄肉、白肉3种枇杷花为材料,用高效液相色谱法测定枇杷花中的槲皮素、槲皮苷和苦杏仁苷等功能成分含量.结果表明,品种间的3种功能成分有差异,苫杏仁苷含量以白枇杷花的最高,而槲皮素和槲皮苷的含量以红肉枇杷花的最高.不同花期3种功能成分的含量也有差异,以盛花期的花朵苦杏仁苷含量最高,而晚花期的花朵所含的槲皮素和槲皮苷最高.加工方法对3种功能成分含量也有影响,以烘箱50℃干燥法中枇杷花的槲皮
本研究以枇杷花药胚状体为材料,在前人研究基础上,优化农杆菌介导枇杷花药胚状体的外源基因转化条件,进一步完善枇杷胚状体遗传转化体系,为枇杷性状改良及品种的选育提供理论和实践依据.结果表明:适当的高渗处理,在加入700mg·L-1安比西林或200mg·L-1头孢霉素的选择培养基中脱菌培养以及共培养后延迟3d筛选的初步转化效果为佳.
褐化是枇杷离体培养的严重障碍,是离体培养能否成功的关键因素.本研究以十年生大五星枇杷树的幼嫩叶片为试材,对叶柄及叶脉离体培养中抗褐化方法进行探讨.研究结果表明,热激处理以45℃、4min抗褐化效果最佳;防褐化物质以PVP效果最佳,Vc次之,AC最差,高浓度的AC甚至能促进褐化;蔗糖随着浓度增加褐化率升高,但是过低浓度的蔗糖会由于碳源缺乏而影响愈伤组织生长,以25g/L为宜,琼脂以7.5g/L、PH
池塘养殖的目的和手段养殖的目的是赚钱!赚钱的手段是把饲料变成水产品.水产养殖活动的本质养殖活动的本质是蛋白转化:将低脂的饲料蛋白转化为高级的水产品蛋白.有条件的养殖场应该配备发电机，各种水质检测、报警设施，根据设计产量、饲料用量配置合理的增氧机，有条件的情况下尽可能配置涌浪机，根据池塘面积和养殖密度配置投饵机。
通过福建省不同产区、不同海拔、山地与田地、不同砧木、不同修剪方法和不同施肥管理等条件对早钟6号枇杷裂果的影响。结果表明，莆田城厢区与莆田仙游县0级、1级裂果差异极显著；与福州连江县0级、1级裂果差异显著；与莆田涵江区1级裂果差异显著；与其它地区差异不显著。其中莆田城厢区裂果抗性较强，莆田仙游县裂果抗性较弱，莆田涵江区、福州连江县和漳州云霄县裂果抗性表现一般；枇杷二次短截修剪的果实裂果抗性较强，而普
2013年12月攀枝花市枇杷发生大面积低温冻害，在主栽区域针对不同海拔、立地环境、品种、生长发育期等情况展开冻害调查分析，掌握了金沙江干热河谷区枇杷冻害发生程度与以上因素的相关性，为以后该生态区发展枇杷产业的布局规划和果园选址提供了指导依据。
为比较高效新法二联苗与进口专用于雏鸡1日龄免疫的囊胚宝、威力克的免疫效果,将160只1日龄SPF鸡和220只商品肉鸡均分成4组,分别免疫囊胚宝+ND灭苗、威力克+ND灭苗、新法二联苗(其中ND含量与单苗相当)和仅免ND灭苗对照组.免疫后每周抽样检查各组鸡法氏囊囊/体比值、检测IBD和ND抗体,并定期做攻毒试验.结果显示,1日龄SPF鸡免疫囊胚宝组,7日龄后法氏囊严重萎缩,仅为对照组和其他组1/4～
辽宁地区养蜂的特点是规模小、小转地、生产产品单一,受当地蜜源所限,加之病虫害和极端天气的影响,养蜂生效益始终不高.为了提高养蜂生产效益,养蜂人就要从提高生产技术入手,通过引进蜂种、规模化饲养、防疫灭病,从多方位多角度提高养蜂生产效益.