【摘 要】
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目的:为初步探讨中药青光安含药血清对体外培养视网膜神经节细胞的作用机制和为中药对青光眼的体外疗效研究提供一种新的研究方法. 方法:不同浓度青光安颗粒剂和益脉康片
【机 构】
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湖南中医药大学中医眼科学重点学科,长沙 410208
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目的:为初步探讨中药青光安含药血清对体外培养视网膜神经节细胞的作用机制和为中药对青光眼的体外疗效研究提供一种新的研究方法.
方法:不同浓度青光安颗粒剂和益脉康片剂给3月龄SD大鼠灌胃,获取不同含药浓度的大鼠血清;建立视网膜神经节细胞纯化培养的常压和高压模型,并用流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞百分率;利用流式细胞仪进行细胞凋亡中Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的检查.
结果:成功获取中药的含药血清,并将其用于视网膜神经节细胞的体外培养;成功分离并培养了视网膜神经节细胞纯化培养模型,RNCs的混合培养最长可存活3～6周,RGCs的纯化培养可存活时间4～7天;成功对纯化培养的细胞进行压力造模.压力20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg,加压时间1～4小时均能促进RGCs的凋亡,其凋亡细胞的数目以80mmHg、4小时为最多(P＜0.01).含药血清作用于纯化培养的视网膜神经节细胞后,Bc1-2的表达随青光安含药浓度的增高而增高,Bax的表达随青光安含药浓度的增高而降低,青光安20倍组明显优于模型组和空白组(P＜0.01),青光安20倍组优于益脉康5倍组(P＜0.05),青光安10倍组与青光安5倍组、益脉康5倍组无显著性差异.
结论:压力能促进RGCs的凋亡,其凋亡细胞的数目随压力的增大、加压时间的延长而增加;青光安含药血清能延缓RGCs的凋亡,对其有保护作用;利用含药血清对体外培养的细胞进行试验,是中药药效试验的重要方法之一.
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