【摘 要】
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目的：探究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在氢气保护小鼠心肌缺血再灌注损伤时的作用.方法：健康雄性C57 BL/6小鼠随机分为8组(n=20)：假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、氢气治疗组(I/R+H2组)、氢气+LY294002组(I/R+H2+LY组)、氢气+Wortmannin组(I/R+H2+W组)、LY294002组(I/R+LY组)、Wor
【出 处】
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第二届氢分子生物医学学术交流会暨中国医疗保健国际交流促进会氢分子生物医学专业委员会第二次会议
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目的：探究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在氢气保护小鼠心肌缺血再灌注损伤时的作用.方法：健康雄性C57 BL/6小鼠随机分为8组(n=20)：假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、氢气治疗组(I/R+H2组)、氢气+LY294002组(I/R+H2+LY组)、氢气+Wortmannin组(I/R+H2+W组)、LY294002组(I/R+LY组)、Wortmannin组(IR+W组)、假手术+氢气组(Sham+H2组).采用结扎左冠状动脉前降支45 min、再灌注240min的方法制备心肌缺血再灌注损伤横型.给氢气组分别于再灌注即刻呼吸浓度为66.7％的氢气90 min,抑制剂组分别于动物手术前腹腔注射LY294002 40mg/kg、Wortmannin 3mg/kg.于再灌注240 min时取心脏,组织切片进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,采用TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(AI),免疫组化法检测p-Akt、NF-κB、p-GSK-3β和Caspase-3的表达量.同时取心脏组织匀浆,Westem Blot法检测p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、eNOS、FOXO1、FOXO3、p-Bad/Bad、p-IκB/IκB、NF-κB、Fas-L/Fas、Caspase-3、Bcl-2、Bax、胞质内Cyto-C、线粒体内Cyto-C、p-ERK/ERK、p-p38MAPK/p38MAPK和p-JNK/JNK；实时定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测TNF-α、 IL-6和MCP-1；酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TNF-α、 IL-1β和IL-6；化学发光法检测Caspase-3和Caspase-9活性.结果：与Sham组比较,AI值升高；心肌p-Akt、 NF-κB、p-GSK-3β和Caspase-3的表达均上调；TTC染色显示缺血面积大幅增加；WB结果表明各种蛋白表达量及磷酸化水平均升高；TNF-α、 IL-6和MCP-1的mRNA转录水平上调；心肌中TNF-α、 IL-1β和IL-6含量增加；Caspase-3/9活性上调.与I/R组比较,I/R+H2组缺血面积和AI值圴下调；心肌 p-Akt、NF-κB、p-GSK-3β和Caspase-3的表达均下调；WB结果表明p-Akt/Akt、 p-GSK-3β/GSK-3β、p-Bad/Bad、Fas-L/Fas、p-ERK/ERK和p-p38MAPK/p38MAPK比值上调,p-IκB/IκB和p-JNK/ JNK比值下调,eNOS、Bcl-2及线粒体内Cyto-C含量上调,FOXO1、FOXO3、Caspase-3、NF-κB、Bax及胞质内Cyto-C含量下调；TNF-α、 IL-6和MCP-1的mRNA转录水平下调；心肌中TNF-α、 IL-1β和IL-6含量升高；Caspase-3/9活性下调.抑制剂能够显著阻断H2的治疗效果.Sham+H2组无明显变化.结论：呼吸高浓度氢气可通过激活PI3K/Akt信号通路,进而上调抗凋亡蛋白及下调促凋亡蛋白以及炎症反应因子,抑制小鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡和组织炎症.
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