【摘 要】
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背景 FAT10是近期被发现的类泛素蛋白家族成员之一,其在心脏中的生物学功能尚未被定义。本研究的目的是确定FAT10在心肌细胞凋亡中发挥的作用。方法 (1)通过结扎冠脉左前降支构建大鼠心梗模型,检测梗死边缘区FAT10的蛋白表达。(2)体外构建FAT10过表达慢病毒,转染大鼠原代心肌细胞后暴露于缺氧/复氧的环境中,通过流式细胞术与TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率,用Westernblot检测凋亡相
【机 构】
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心血管内科,南昌大学第二附属医院;江西分子医学重点实验室,南昌大学第二附属医 江西分子医学重点实验
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背景 FAT10是近期被发现的类泛素蛋白家族成员之一,其在心脏中的生物学功能尚未被定义。本研究的目的是确定FAT10在心肌细胞凋亡中发挥的作用。方法 (1)通过结扎冠脉左前降支构建大鼠心梗模型,检测梗死边缘区FAT10的蛋白表达。(2)体外构建FAT10过表达慢病毒,转染大鼠原代心肌细胞后暴露于缺氧/复氧的环境中,通过流式细胞术与TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率,用Westernblot检测凋亡相关蛋白BCL-2与BAX的表达量。(3)在原代大鼠心肌细胞中过表达FAT10后,分别利用Westernblot与qRT-PCR检测下游通路蛋白与microRNA的表达水平。结果 在梗死大鼠心肌梗死边缘区与缺氧/复氧处理的大鼠原代心肌细胞中,FAT10表达量明显升高。在大鼠原代心肌细胞中过表达FAT10可以降低缺氧/复氧引起的细胞凋亡,并且升高抗凋亡蛋白BCL-2的表达,下调促凋亡蛋白BAX的表达。缺氧/复氧可以促进P53的表达,但是过表达FAT10可以显著减弱这一趋势,进而抑制了P53下游一个起着促凋亡作用的microRNA(miR-34a)的表达,最终达到升高BCL-2降低BAX而起到对抗心肌细胞凋亡的作用。结论 FAT10在心脏和原代大鼠心肌细胞缺氧/复氧应激作用下的表达量升高。上调的FAT10可通过抑制p53和miR-34a的表达以及改变BCL2/BAX通路而防止心肌细胞凋亡。因此,我们得出结论FAT10是一个心脏保护性基因,FAT10的表达上调可能对心肌细胞凋亡相关的病理改变起有益作用。
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