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目的:通过设立相应的实验组与对照组探索比格犬成肌细胞在转染了hCDMP—2基因后对比格犬半月板纤维软骨组织损伤修复的作用。方法:在PubMed上检索hCDMP—2 CDS序列,进行CDS序列合成,hCDMP—2基因PCR产物的克隆,阳性克隆的筛选与鉴定,序列测定与BLAST分析。用慢病毒载体系统将hCDMP—2基因转染至体外分离纯化后的比格犬成肌细胞,采用实时荧光定量PCR(Real-time Fluorescence Quantitative PCR)方法进行转染成功率及转染后细胞hCDMP—2基因表达的鉴定,同时采用westernblot方法鉴定转染后细胞hCDMP—2蛋白的表达。使用进口PGA支架材料,通过特定的模具成形,滴加PLA,进行PLA/PGA支架的制作。制作比格犬半月板损伤模型:半月板前角距离前缘0.5cm处横贯整个半月板横径不保留基底部、宽2mm、关节囊缘厚2mm、关节腔缘厚1.5mm的缺损,损伤区涉及红—红区、红—白区与白—白区。进行比格犬半月板损伤修复体内分组动物实验:设立单纯缝合组(A组)、加有hCDMP—2细胞因子的PLA/PGA支架缝合组(B组)、单纯转染慢病毒的成肌细胞与PLA/PGA支架复合物移植缝合组(C组)以及转染hCDMP—2基因的成肌细胞与PLA/PGA支架复合物移植缝合组(D组)。分别在损伤修复后第3、8、12周取材,进行大体观察、形态学(HE染色、Safranin-O染色)及免疫组织化学(Ⅱ型胶原、S-100蛋白、Ⅰ型胶原)的定性检测,同时还分别对半月板不同缺损区(红—红区与白—白区)的修复组织进行组织学的定量检测(ELISA方法检测Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白的表达及Alcian Blue法检测GAG蛋白的表达)。结果:(1)通过A组、B组与C组治疗的半月板缺损修复区未见有新生组织出现;本课题使用的PLA/PGA支架材料在体内会逐步降解,完全降解的时间为8周。(2)D组采取的方法能够使本课题中的半月板缺损局部有新生修复组织出现,而且该修复组织具有纤维软骨组织的特征。(3)D组采取的方法能够使本课题中的半月板缺损局部有类似于纤维软骨组织的新生修复组织出现,同时证明半月板红—红区的损伤比白—白区修复得快。结论:1、单纯缝合、单纯使用hCDMP—2因子与单纯的成肌细胞治疗在体内都不能促进本课题半月板缺损区纤维软骨组织损伤的修复。2、转染hCDMP—2基因的纯化成肌细胞可促进体内半月板纤维软骨组织各区损伤的修复,红—红区比白—白区修复得快。3、本研究中使用的方法为临床上治疗较大的半月板缺损提供了新的治疗思路。