【摘 要】
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目的：研究自高表达Her-2/neu的乳腺癌细胞株SKBR-3中分离纯化热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)-Her-2/neu癌基因蛋白复合物的方法。以HSP70的分子伴侣功能为基
【机 构】
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首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤内科,北京,100038
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目的：研究自高表达Her-2/neu的乳腺癌细胞株SKBR-3中分离纯化热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)-Her-2/neu癌基因蛋白复合物的方法。以HSP70的分子伴侣功能为基础,获得包含Her-2蛋白在内的相对全面的肿瘤抗原肽复合物,为以Her-2为靶点的细胞免疫治疗奠定基础。方法：采用裂解液裂解(含去垢剂)、超声破碎、高速离心、ConA Sepharose亲和层析结合ADP agarose亲和层析方法,从热休克处理后的乳腺癌细胞株SKBR-3中分离纯化出HSP70-Her-2/neu癌基因蛋白复合物,通过SDS-PAGE电泳及免疫斑点实验检测进行蛋白分子质量及性质鉴定,同时检测自5×108个SKBR-3细胞分离纯化获得的目的蛋白复合物总量。结果：检测结果证明纯化后获得的蛋白复合物中包含相对分子质量为70KD及185KD的蛋白,且分别能与抗HSP70特异性单克隆抗体及抗Her-2特异性单克隆抗体结合。
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