【摘 要】
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目的:探讨用骨髓基质干细胞(BMCs)诱导分化的内皮细胞和去细胞天然瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)的可行性,寻找构建TEHV更为便捷的种子细胞来源.方法:骨髓穿刺抽取
【机 构】
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第二军医大学长海医院胸心外科,上海,200433
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目的:探讨用骨髓基质干细胞(BMCs)诱导分化的内皮细胞和去细胞天然瓣膜支架体外构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)的可行性,寻找构建TEHV更为便捷的种子细胞来源.方法:骨髓穿刺抽取绵羊骨髓液,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,通过贴壁培养纯化BMSCs.以含VEGF等细胞因子的M199培养液诱导原代BMSCs向内皮细胞分化.采用去污剂和酶消化法制作去细胞猪主动脉瓣膜支架.通过静态种植方法将分化内皮细胞接种于瓣膜支架上构建TEHV.分别行石腊包埋切片HE染色,免疫组化染色,扫描电镜及透射电镜检查观察TEHV的组织学和超微结构.结果:石腊切片HE染色示诱导分化内皮细胞在去细胞瓣叶支架及整体瓣膜支架上的均呈单层生长,形成完整的内皮细胞单层.整体瓣膜的瓣叶、主动脉和瓣膜交界处、主动脉管道及瓣下肌肉内面均有细胞分布,管道外部及瓣叶的心室面无细胞生长.瓣叶表面细胞CD34及Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色阳性.扫描电镜示BMSCs诱导分化内皮细胞在瓣叶表面呈梭形,排列有序,形成完整的细胞单层.透射电镜示瓣膜支架细胞去除完全,瓣叶表面为单层细胞覆盖.细胞呈梭形,细胞质内粗面内质网及分泌小泡较BMSCs为少.结论:BMSCs诱导分化的内皮细胞具有与成熟内皮细胞具有相同的生物学特性.采用BMSCs诱导分化内皮细胞构建TEHV更为简便可行.TEHV的在体改建尚需进一步研究.
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