牛胚胎干细胞分离与克隆

• 作 者: 安立龙 窦忠英 邱怀
• 机 构: 西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室
• 出 处: 第五届海内外生命科学论坛
• 发表日期: 2000年4期
• 关键词: 牛 胚胎干细胞 内细胞团 细胞分离 细胞克隆

选用荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎,以DMEF细胞为饲养层,以DMEM+15％NBS+0.1 μM Na2SeO3+0.1 mM β-巯基乙醇+10 ng/ml IGF+1000 IU/ml LIF为培养液,用消化法(ICM用0.25％胰蛋白酶+0.04％EDTA),ES细胞集落用(0.125％胰蛋白酶+0.02％EDTA)和机械拨离法离散ICM细胞集落和隆起明显的ES细胞集落为细胞小块,获得了9个传至6代的牛类ES细胞系和22个传至9代的小鼠类ES细胞系.从形态特征、组织化学染色、核型分析和ES细胞分化能力等方面对所分离与克隆的细胞进行鉴定,证明其具有ES细胞的诸多特性.