【摘 要】
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目的：将空肠弯曲菌肠菌素受体蛋白CfrA编码基因导入食品级乳酸乳球菌表达系统,将构建的重组乳酸乳球菌口服免疫鸡,达到降低空肠弯曲菌在鸡肠道中定植的目的.
方法：利用PCR
【机 构】
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北京市农林科学院畜牧兽医研究所,畜禽疫病防控技术北京市重点实验室,北京,100097;山东农业大学动物科技学院,山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室,山东泰安,271018北京市农林科学院畜牧兽医研
【出 处】
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第十一届北京畜牧兽医青年科技工作者“新思想 新观点 新方法”论坛
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目的：将空肠弯曲菌肠菌素受体蛋白CfrA编码基因导入食品级乳酸乳球菌表达系统,将构建的重组乳酸乳球菌口服免疫鸡,达到降低空肠弯曲菌在鸡肠道中定植的目的.
方法：利用PCR分别扩增空肠弯曲菌CfrA全基因及N端片段,插入食品级表达载体pNZ8149并转化乳酸乳球菌NZ3900,通过Western blot鉴定重组菌株CfrA蛋白表达情况,同时通过筛选Nisin浓度、温度、时间等诱导条件优化重组蛋白表达水平;进而将重组乳酸乳球菌经口服免疫SPF鸡,免疫后分别测定乳酸乳球菌自鸡体内的排出情况、以及诱导CfrA血清抗体和粘膜抗体水平,最后将空肠弯曲菌口服攻毒鸡,通过测定鸡泄殖腔棉拭子中空肠弯曲菌的数目来判定口服免疫效果.
结果：蛋白表达检测显示CfrA全基因及其N端片段均可在重组乳酸乳球菌体内可溶性表达,表达蛋白不能分泌至菌体外,筛选的最佳诱导表达条件为nisin浓度25ng/ml、温度37℃、时间1h.口服乳酸乳球菌10d内自鸡体完全排出;鸡口服免疫后可产生CfrA蛋白特异性的血清IgG和肠粘膜sIgA抗体;重组乳酸乳球菌口服免疫后空肠弯曲菌在鸡体内的增殖速度显著低于空载体组和空白对照组.
结论：表达CfrA蛋白的重组乳酸乳球菌口服免疫鸡对空肠弯曲菌的定植具有一定的抑制作用,为研制重组乳酸菌口服疫苗防治空肠弯曲菌奠定了基础.
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