安徽省岳西县猕猴桃细菌性溃疡病发病规律及快速鉴定的研究

• 作 者: 伊兴凯 陈雨 高正辉 张金云 王艳华 徐义流
• 机 构: 安徽省农业科学院园艺研究所; 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所; 岳西县原生态果菜专业合作社; 安徽省农业科学院
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 猕猴桃 溃疡病 发病规律 分离鉴定 快速检测
• 基金项目: 安徽省农业科学院重点及新兴学科培育项目(12A0303);安徽省水果‘115’创新团队项目(皖人才办[2011]2号);安徽省水果产业技术体系项目(皖农科[2011]6号)

猕猴桃细菌性溃疡病（Kiwifruit bacterial canker）传播迅速,危害程度日趋严重,主要危害猕猴桃的枝蔓、叶片,严重时可造成整株死亡。为此,掌握猕猴桃溃疡病发病规律,早期诊断与快速鉴定是该病防控的重要措施。在安徽省岳西县（猕猴桃溃疡病发病较重的产区）不同产区系统调查了猕猴桃‘金魁’溃疡病发病有关的环境因子（海拔高度、坡向）和发病特征（枝龄、皮孔）、发病时期等。同时,采集发病植株的枝条,对溃疡病病原菌进行分离和培养纯化,用70%的酒精消毒后,挑取少许病斑与非病斑交界处的新鲜病样组织,放到无菌的培养皿中,加入0.5 mL的灭菌水,用玻璃棒碾碎后静置30 min,在细菌培养基上划线培养,待长出病菌后,再用液体培养基摇培,取菌液送样测序。结果表明,猕猴桃溃疡病在冻害严重的植株上发病较重,尤其海拔高度630⁷20 m,果园坡向背北向南。病菌是在植株冬季休眠期时开始由皮孔、伤口等侵入,在伤流期前后危害程度达到高峰,发病枝条皮孔的平均密度为3.91个·cm^-2,皮孔平均长度为0.31 mm,皮孔为长圆形,非线形排列。病原菌在花芽形成前后,多因冻伤侵入寄主或从伤口处侵入寄主体内,孕蕾期发病最重,发病率达9.67%。叶片发病时产生褐色的病斑和黄色的晕圈,枝条发病初期有白色菌脓溢出,随后呈褐色的粘液附在病斑表面,伴有病斑上部枝条萎蔫、腐烂。3⁵年生枝条发病率最高,达5.94%。对提取病菌的基因组DNA,通过PCR扩增其16S rDNA的部分片段并测序,NCBI数据库进行比对结果显示,安徽省岳西县猕猴桃溃疡病菌是丁香假单孢杆菌猕猴桃致病菌（Pseudomonas syringae pv.actinidae）。根据该病菌的16S-23S rDNA保守区域设计特异性引物PsaF1 5’-TTTTGCTTTTGCACACC CGATTTT-3′与PsaR2 5’-CACGCACCCTTCAATCAGGATG-3′,特异性PCR扩增试验结果表明,该对引物只能从该病菌中特异性扩增出1条280 bp的片段,而从其它属的细菌中不能扩增出该片段,因此,该引物可以作为快速检测猕猴桃溃疡病菌的特异性引物。