【摘 要】
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拟禾本科根结线虫(Meloidogyne graminicola)系水稻上一种重要的病原生物,是一种典型的定居性性内寄生线虫.它能使水稻的整个生育期发病,对水稻典型的危害症状是被侵染的根尖形成钩状根结.钙网蛋白(Calreticulin)是一类普遍存在于多细胞真核生物中高度保守的钙结合分子伴侣,定位于内质网,在蛋白质的折叠、mRNA的降解、胞内Ca2*平衡调控发挥着重要的作用.钙网蛋白由许多动植物
【机 构】
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浙江大学生物技术研究所,杭州310058
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拟禾本科根结线虫(Meloidogyne graminicola)系水稻上一种重要的病原生物,是一种典型的定居性性内寄生线虫.它能使水稻的整个生育期发病,对水稻典型的危害症状是被侵染的根尖形成钩状根结.钙网蛋白(Calreticulin)是一类普遍存在于多细胞真核生物中高度保守的钙结合分子伴侣,定位于内质网,在蛋白质的折叠、mRNA的降解、胞内Ca2*平衡调控发挥着重要的作用.钙网蛋白由许多动植物寄生虫分泌到宿主组织中,在侵染、寄生、致病和免疫过程中发挥重要作用,它被认为是控制植物寄生线虫的理想靶标.本研究通过已有的拟禾本科根结线虫的转录组数据,利用RACE技术克隆获得了拟禾本科根结线虫钙网蛋白基因的cDNA全长,并对克隆序列进行了分析.Mg-CRT cDNA序列全长为1 716bp,其中开放阅读框(ORF)区域长为1248bp,可以编码一个含415个氨基酸的蛋白质.预测蛋白N端含有信号肽,同时在预测蛋白5～20个氨基酸处有较强的跨膜信号,表明其为分泌型蛋白.不同生物体的Mg-CRT氨基酸序列的多重序列比对结果显示Mg-CRT与其他物种的CRT序列有很高的相似性.原位杂交结果显示Mg-CRT在侵染前二龄幼虫的亚腹食道腺中表达；qRT-PCR分析证实,在线虫发育过程中,Mg-CRT表达水平升高,并在J3/J4龄期达到最高.Mg-CRT体外RNA干扰后,靶基因的转录水平显著下调,接种dsRNA浸泡后的二龄幼虫50 h后,酸性品红染色观察水稻根内二龄幼虫的数量与对照相比显著降低.Mg-CRT基因的克隆和分析为深入研究其对拟禾本科根结线虫的致病力的作用机制奠定基础.
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