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目的:本实验采用血清药理学方法探讨薯蓣皂苷含药血清对氧化损伤心肌细胞凋亡的作用及其机制。
方法:1、血清药理学方法采集含药血清。2、培养原代乳鼠心肌细胞,建立氧化损伤模型,以含药血清进行干预,MTT法检测细胞存活率。3、Hoechst33258荧光染色法观察药物作用后心肌细胞形态学变化。4、caspase-3活性测定方法探讨薯蓣皂苷抗凋亡途径。5、Western blot方法测定薯蓣皂苷对Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。
结果:1、MTT法作用结果显示,将原始收集血清稀释为相当于灌胃0.4g、0.8g、1.2g生药/kg浓度时,相对于H202单纯损伤组和空白血清组心肌细胞有较高的存活率(P<0.01),且呈现一定的剂量依赖性。2、Hoechst33258荧光染色结果显示:与H202组相比,含药血清组随着药物浓度升高细胞核固缩凝聚减轻,碎片依次减少。3、与H2O2组相比,caspase-3活性随含药血清浓度增高而降低。4、与H2O2组相比,薯蓣皂苷给药组能够下调Bax水平,上调Bcl-2水平,且呈现剂量依赖性。
结论:(1)薯蓣皂苷能够提高H2O2诱导的原代乳鼠心肌细胞存活率;(2)降低caspase-3活性;减轻细胞核固缩和聚集,减少细胞核碎片;且能够降低Bax表达水平,提高Bcl-2表达水平。