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猪繁殖与呼吸障碍综合征是由PRRSV引起的一种高度接触性传染病,是危害全世界生猪养殖业的重要疫病之一.PRRSV侵入宿主细胞,需要与细胞膜表面特异性受体结合,利用细胞内吞作用感染细胞,受体是病毒侵入的首要门户.
本研究利用两种系统分别设计了针对NMHCⅡ-A基因的TALEN载体和在杆状病毒表达系统表达的CRISPR-Cas9载体，测序结果表明工程核酸酶均构建正确。
Western blot结果显示工程核酸酶可以在Sf9细胞系中有效表达。将靶标序列克隆至SSA检测载体上，利用双荧光素酶系统检测工程核酸酶的体外切割活性。通过对PRRSV感染基因编辑细胞系的感染力研究，并结合NMHCⅡ-A的基因功能鉴定NMHCⅡ-A基因编辑细胞系的基本特性，有助于了解PRRSV侵入过程，从而为阐明PRRSV和NMHCⅡ-A之间相互作用的依赖性方式提供依据。
利用Golden Gate的方法可以高效组装含有大量重复序列的TALEN的表达载体。AcMuttiBac杆状病毒表达系统能够使工程核酸酶得到高效的表达。双荧光素酶报告载体检测可以有效验证工程核酸酶的切割效率为进一步的基因编辑奠定基础。