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目的：探索周围神经可视化虚拟重建中神经纤维与神经束功能性质组织学水平的形态学定位方法.方法：取成年男性新鲜截肢右腕部正中神经标本1例行连续冰冻切片,取形态完整标本切片30个,采用Karnovsky-Roots-甲苯胺蓝-水溶性猩红复染法对切片染色,获取Karnovsky-Roots染色(trail1)、甲苯胺蓝复染(trail2)、水溶性猩红复染(trail3)三各主要染色阶段的染色结果 全景图像,比图像纹理特征、乙酰胆碱酯酶阳性部位数量,对比计算机自动获取神经束轮廓结果,并尝试进行节段神经可视化虚拟重建,以确立理想的染色方案.结果：Karnovsky-Roots-甲苯胺蓝-水溶性猩红三种染色的结果,髓鞘显示清晰,不同性质神经纤维纹理特征明晰；各主要阶段染色结果 图像中乙酰胆碱酯酶阳性位点的数量差异无统计学意义(F=0.34P=0.714)；采用Gabor滤波结合粗糙K-均值设计的算法对神经束区域进行分割,Karnovsky-Roots-甲苯胺蓝-水溶性猩红图像处理结果中基本实现自动化.结论：Karnovsky-Roots-甲苯胺蓝-水溶性猩红复染法不影响神经标本乙酰胆碱酯酶阳性部位的表达,图像纹理特征清晰,能够在组织学水平分辨神经纤维及神经束功能性质,较易实现满意的神经束区域分割,节段神经可视化虚拟重建过程中自动化程度较高,可以作为周围神经可视化虚拟重建的标准化染色流程.