【摘 要】
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利用PCR技术克隆出一对增强子(prostate specific antigen enhancer,PSAE)和两对启动子(prostate specific antigen promoter,PSAP)片段,构建三组pTAL-Luc表达质粒,观察基因表达情况以优选最佳表达质粒并验证其组织特异性。采用PCR技术分别扩增PSA增强子及启动子片段,将扩增的PSA启动子/增强子片段分别克隆入荧光素酶报
【机 构】
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苏州大学附属第二医院影像科 苏州大学分子诊断实验室
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利用PCR技术克隆出一对增强子(prostate specific antigen enhancer,PSAE)和两对启动子(prostate specific antigen promoter,PSAP)片段,构建三组pTAL-Luc表达质粒,观察基因表达情况以优选最佳表达质粒并验证其组织特异性。采用PCR技术分别扩增PSA增强子及启动子片段,将扩增的PSA启动子/增强子片段分别克隆入荧光素酶报告基因载体pTAL-Luc,并构建三组含不同调控序列的重组质粒PSAP1-Luc,PSAP2-Luc以及PSAE-Luc,将三组重组质粒分别和内参照β-半乳糖甘酶共转染入三株癌细胞,前列腺癌细胞(PC-3)、宫颈癌细胞(Hela)和乳腺癌细胞(MCF-7)中,并定量测出荧光素酶及β-半乳糖甘酶基因表达情况。成功构建重组质粒PSAP1-Luc、PSAP2-Luc和PSAE-Luc；前列腺癌细胞(PC-3)中表达的荧光素酶活性高于宫颈癌细胞(Hela)和乳腺癌细胞(MCF-7),表明PSA启动子/增强子调控基因表达具有前列腺组织特异性；PSA启动子和增强子均可调控荧光素酶基因表达,而以包含620bp长度的PSAP2启动子调控的荧光酶基因表达活性最强,其为本实验筛选出的最优长度的PSA启动子序列,PSAP2可能在由PSA启动子介导的前列腺癌靶向基因治疗研究中具有一定的应用价值。
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