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[目的]研究苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬及凋亡的作用,为苦参碱用于乳腺癌治疗提供理论依据.
[方法]不同浓度苦参碱(0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 mg/ml)分别作用于乳腺癌Bcap-37细胞,采用MTT法检测它们作用24、48、72h的细胞增殖抑制率；用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态变化；经 Annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)双染后,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率；并运用Western-blotting方法检测Cleaved PARP和k3b-I/Lc3b一Ⅱ蛋白表达水平。苦参碱联合自噬抑制剂氯喹(chloroquine)处理Bcap.37细胞,运用MTT法检测细胞增殖抑制率的变化.实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计,计量资料用均数士标准差(x±s)表示,多组均数间比较用方差分析,两组均数比较用t检验,均以P<0.05为差异显著的检验标准。
[结果](1)苦参碱对乳腺癌Bcap-37细胞的增殖有显著的抑制作用,并发现其生长抑制作用强度呈浓度和时间依赖性。(2)乳腺癌Bcap-37细胞经苦参碱作用24h后,经流式细胞技术检测证实能明显诱导细胞凋亡.其凋亡率与苦参碱浓度成正相关,空白组、1mg/ml组和2mg/ml早期凋亡率分别为5.20%、10.42%和32.90%,总凋亡率分别为7.66%、14.39%和52.48%；经Westem-blot ting测定显示,苦参碱浓度在2mg/ml时Cleavecl PARP蛋白印迹条带灰度明显加深.此外,在光镜下还发现胞浆出现大量囊性小泡,经透射电镜扫描证实细胞发生自噬现象：Weslem-blot ting检测发现伴随k3b-II蛋白表达上调.表明在苦参碱作用下肿瘤细胞存在凋亡与自噬共存现象.(3)但是,在苦参碱基础上联合自噬抑制剂氯喹,Bcap-37细胞的增殖抑制作用反而更强,联合组较苦参碱组和苦参碱组较对照组或氯喹组均表现为明显的生长抑制作用(P<0.01),而自噬抑制剂氯喹确有刺激肿瘤生长的趋势(P=0.53).
[结论]①苦参碱可显著抑制人乳腺癌Bcap-37细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,作用机制为促进肿瘤细胞凋亡,并伴随细胞自噬现象；②苦参碱诱导的人乳腺癌Bcap-37细胞自噬现象可能是细胞的一种保护性反应,部分限制了苦参碱对肿瘤细胞的促凋亡作用,而自噬抑制剂氯喹则可增强苦参碱抑制细胞增殖的作用。
[方法]不同浓度苦参碱(0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 mg/ml)分别作用于乳腺癌Bcap-37细胞,采用MTT法检测它们作用24、48、72h的细胞增殖抑制率；用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态变化；经 Annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)双染后,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率；并运用Western-blotting方法检测Cleaved PARP和k3b-I/Lc3b一Ⅱ蛋白表达水平。苦参碱联合自噬抑制剂氯喹(chloroquine)处理Bcap.37细胞,运用MTT法检测细胞增殖抑制率的变化.实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计,计量资料用均数士标准差(x±s)表示,多组均数间比较用方差分析,两组均数比较用t检验,均以P<0.05为差异显著的检验标准。
[结果](1)苦参碱对乳腺癌Bcap-37细胞的增殖有显著的抑制作用,并发现其生长抑制作用强度呈浓度和时间依赖性。(2)乳腺癌Bcap-37细胞经苦参碱作用24h后,经流式细胞技术检测证实能明显诱导细胞凋亡.其凋亡率与苦参碱浓度成正相关,空白组、1mg/ml组和2mg/ml早期凋亡率分别为5.20%、10.42%和32.90%,总凋亡率分别为7.66%、14.39%和52.48%；经Westem-blot ting测定显示,苦参碱浓度在2mg/ml时Cleavecl PARP蛋白印迹条带灰度明显加深.此外,在光镜下还发现胞浆出现大量囊性小泡,经透射电镜扫描证实细胞发生自噬现象：Weslem-blot ting检测发现伴随k3b-II蛋白表达上调.表明在苦参碱作用下肿瘤细胞存在凋亡与自噬共存现象.(3)但是,在苦参碱基础上联合自噬抑制剂氯喹,Bcap-37细胞的增殖抑制作用反而更强,联合组较苦参碱组和苦参碱组较对照组或氯喹组均表现为明显的生长抑制作用(P<0.01),而自噬抑制剂氯喹确有刺激肿瘤生长的趋势(P=0.53).
[结论]①苦参碱可显著抑制人乳腺癌Bcap-37细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,作用机制为促进肿瘤细胞凋亡,并伴随细胞自噬现象；②苦参碱诱导的人乳腺癌Bcap-37细胞自噬现象可能是细胞的一种保护性反应,部分限制了苦参碱对肿瘤细胞的促凋亡作用,而自噬抑制剂氯喹则可增强苦参碱抑制细胞增殖的作用。