【摘 要】
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目的 探讨HSP27与儿童急性白血病的发病关系,阐明HSP27对白血病细胞化疗敏感性的影响及机制研究.方法 收集我院近2年诊断为儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)和急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患儿的骨髓单个核细胞(BMMCs),以及白血病细胞株,通过逆转录PCR及蛋白印迹方法检测HSP27表达；MTT法检测HSP27对白血病细胞化疗敏感性的影响；流式细胞学和蛋白印迹检测细胞的凋亡率；蛋白印迹
【机 构】
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中南大学湘雅医院儿科,湖南 长沙 410008
【出 处】
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庆祝中国当代儿科杂志创刊15周年大会暨当代儿科论坛
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目的 探讨HSP27与儿童急性白血病的发病关系,阐明HSP27对白血病细胞化疗敏感性的影响及机制研究.方法 收集我院近2年诊断为儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)和急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患儿的骨髓单个核细胞(BMMCs),以及白血病细胞株,通过逆转录PCR及蛋白印迹方法检测HSP27表达；MTT法检测HSP27对白血病细胞化疗敏感性的影响；流式细胞学和蛋白印迹检测细胞的凋亡率；蛋白印迹、透射电镜等方法检测化疗药物处理THP-1细胞后自噬的发生,以及HSP27对细胞自噬的影响；最后,阐明高迁移率族蛋白(HMGB1)参与HSP27对自噬的调控,可能是HSP27调节自噬的机制之一.结果 (1)HSP27在初治患儿AMLM4/M5骨髓单个核细胞(BMMCs)中搞表达,与疾病的病情相关,HSP27在你初治和复发组的表达明显高于缓解和正常对照组.同时,对白血病细胞株的研究发现,HSP27在THP-1和K562细胞株中高表达.(2)以THP-1细胞株为研究对象,RNA干扰下调细胞中HSP27的表达能显著增加THP-1对化疗药物的敏感性,以及THP-1细胞凋亡率、cleaved PARP和cleaved casepase-3表达水平.(3) HSP27介导的自噬反应影响了白血病细胞的化疗耐药.化疗药物(阿霉素、长春新碱)能促使自噬标志蛋白LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转换,其作用效果与经典自噬诱导剂雷帕霉素相当.同时,自噬相关基因Beclin 1基因敲除后,LC3-Ⅱ的表达明显减少,表明化疗药物能促使THP-1的自噬.进一步,RNA干扰下调HSP27表达后,THP-1细胞LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转换和自噬泡的数目明显减少.(4) HSP27介导的自噬反应可能通过HMGB1的调控实现.RNA干扰抑制HMGB1的表达后能显著降低HSP27和蛋白表达,而HMGB1基因敲除后的THP-1细胞转染HMGB1质粒后能恢复HSP27表达；HMGB1 RNA干扰能明显抑制HSP27胞核的移位及血清表达水平.结论 HSP27参与了儿童AML-M4/M5的发病,并影响了白血病细胞化疗药物所致的自噬反应；HSP27介导的自噬反应可能是AML-M4/M5化疗耐药的重要机制之一.
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