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目的：miR-183的显著上调已成为临床肝肿瘤发生的普遍特征,但其在肝癌发生中的分子机制亟待阐明.本研究探讨肝癌细胞Hep3B中miR-183的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白变化.
方法：MTT法检测人正常细胞株LO2及人肝癌细胞株HepG2、Hep3B的细胞增殖活性.提取细胞的总RNA和蛋白,采用RT-qPCR和蛋白印迹法分别检测细胞株中miR-183的表达和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、磷酸化胞内磷脂酰基醇激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、NF-κB抑制蛋白α亚基(IκBα)的蛋白表达水平、程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的蛋白水平.用抑制剂分别抑制Hep3B细胞ERK、PI3K、AKT、NF-KB信号分子的活性并检测miR-183的表达水平及PDCD4蛋白表达水平.
结果：LO2、HepG2、Hep3B细胞在48h的增殖倍数分别为8.76±0.22、16.61±1.59和19.86±0.69,差异有统计学意义,F=159.90,P<0.001.与LO2(41.68±9.62)和HepG2(41.53±1.20)细胞相比,Hep3B(69.15±11.02)细胞表达水平显著升高,F=10.250,P=0.012.与LO2相比,Hep3B细胞的p-ERK1、ERK1、p-AKT、IκBα的蛋白水平明显升高,分别为LO2的10.87、24.68、6.67和1.92倍;PDCD4的蛋白水平明显降,为LO2的0.14倍.与LO2细胞相比,HepG2细胞的IκBα和PDCD4蛋白表达明显升高,分别为LO2的4.46和7.90倍.抑制ERK的活性后12h和24h,miR-183表达水平显著上升,F＝215.459,P<0.001;抑制Hep3B细胞的PI3K活性后12h和24h,miR-183表达水平显著降低,F=80.215,P<0.001;抑制AKT的活性后12h和24h,miR-183表达水平显著下降,F=101.947,P<0.001;抑制NF-κB的活性后12h和24h,miR-183表达水平没有显著变化,F=1.826,P=0.216.有显著的促进作用,而ERK对miR-183的表达有显著的抑制作用,NF-κB不是调控miR-183表达的主要信号分子.PDCD4是miR-183的重要下游靶蛋白.
结论:综上所述，在Hep3B 细胞中，PI3K/AKT 信号通路的活化对miR-183 的表达有显著的促进作用，而miR-183 的高表达显著降低了PDCD4 的蛋白水平。但不同肝癌细胞中miR-183 的表达调控机制不同，其分子机制尚有待进一步阐明。