【摘 要】
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[研究背景]孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)作为核受体超家族NR1I亚家族成员,是体内非常重要的一种外源性受体,猪PXR (pgPXR)在体内参与多种细胞色素酶的代谢及类固醇激素代谢。此外,PXR还是一种多效性基因调节蛋白,在调节动物的生理和病理过程中也起着非常重要的作用。目前实验室已成功构建人PXR(hPXR)重组质粒并得到稳定的细胞株系(hPXR/CYP3A4-Lu
【机 构】
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湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医内科与临床诊疗学分会第八届代表大会暨学术研讨会
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[研究背景]孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)作为核受体超家族NR1I亚家族成员,是体内非常重要的一种外源性受体,猪PXR (pgPXR)在体内参与多种细胞色素酶的代谢及类固醇激素代谢。此外,PXR还是一种多效性基因调节蛋白,在调节动物的生理和病理过程中也起着非常重要的作用。目前实验室已成功构建人PXR(hPXR)重组质粒并得到稳定的细胞株系(hPXR/CYP3A4-Lux),但因种属差异,配体对hPXR与pgPXR的活化能力存在差异。[目的]通过构建pgPXR重组质粒并将其稳定转染至真核细胞中使之稳定表达,从而为进一步探讨pgPXR在动物营养和药物代谢中的作用提供可靠的研究模型和pgPXR天然活性物质的有效筛选方法。[方法]从新鲜猪肝中提取RNA,通过反转录等一系列反应得到pgPXR目的片段,再将目的片段pgPXR与载体pCI-neo酶切连接,并对连接产物进行测序和酶切检测。[结果]PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳得到1 300 bp左右的条带,与目的基因pgPXR大小相符。重组质粒进行测序比对与目的序列相符,酶切后进行琼脂糖凝胶电泳得到1 300 bp左右和5400 bp左右的2条条带,与预期相符。[结论]通过序列分析与双酶切检测表明pgPXR重组质粒构建成功,这为pgPXR的稳定转染提供良好基础,从而为研究pgPXR在动物营养和药物代谢中的作用及pgPXR高通量筛选体系提供理想模型。
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