【摘 要】
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目的:原核表达MMP-9型基质金属蛋白酶,并研究其水解底物明胶的活性. 方法:利用化学合成方法合成blaMMP-9基因,经PCR扩增后克隆至pET-28a载体,构建重组的原核表达质粒pET28
【机 构】
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武汉大学人民医院药学部,湖北 武汉 430060
【出 处】
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第十二届全国青年药学工作者最新科研成果交流会
论文部分内容阅读
目的:原核表达MMP-9型基质金属蛋白酶,并研究其水解底物明胶的活性.
方法:利用化学合成方法合成blaMMP-9基因,经PCR扩增后克隆至pET-28a载体,构建重组的原核表达质粒pET28a-MMP-9,转化至E.coli BL21(DE3),诱导表达.表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,测定其水解底物活性及最适pH值和温度.
结果:重组质粒经测序证明其正确性;表达的重组蛋白相对分子量约为82.3KDa,纯化后蛋白浓度为0.5mg/mL,该酶对其底物明胶具有较高的水解活性,其最适pH值为7.5,最适温度为35℃.
结论:利用工程菌E.coli BL21(DE3)-pET28a-MMP-9成功实现了MMP-9型基质金属蛋白酶的原核表达,为深入研究其生物学功能及作用机制提供了材料.同时也为研发该酶的抑制剂提供了靶标物质.
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