【摘 要】
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目的 砷虽是一种国际公认的致癌物,但其致癌机制尚未完全阐明.本研究通过观察低剂量砷诱导条件下抑癌基因p16、p53 的表达程度及其启动子区的组蛋白H3K9Ac、H3K27Ac 和Sirt1 的富集程度,探讨砷诱导人正常肝细胞(L-02)增殖的机制,为低剂量砷致癌的作用机制提供理论依据.方法 用CCK-8 实验检测砷对细胞增殖能力的影响,用流式细胞仪分析砷对细胞周期分布的影响,用RT-qPCR 检测
【机 构】
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哈尔滨医科大学中国疾病预防控制中心地方病控制中心;黑龙省微量元素与人类健康重点实验室;国家卫生健康委病因流行病学重点实验室
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目的 砷虽是一种国际公认的致癌物,但其致癌机制尚未完全阐明.本研究通过观察低剂量砷诱导条件下抑癌基因p16、p53 的表达程度及其启动子区的组蛋白H3K9Ac、H3K27Ac 和Sirt1 的富集程度,探讨砷诱导人正常肝细胞(L-02)增殖的机制,为低剂量砷致癌的作用机制提供理论依据.方法 用CCK-8 实验检测砷对细胞增殖能力的影响,用流式细胞仪分析砷对细胞周期分布的影响,用RT-qPCR 检测砷对p16 和p53 在mRNA 水平上表达的影响,用Western blot 和免疫荧光技术检测砷对Sirt1 表达及其亚细胞定位的影响；用CHIP 联合qRT-PCR 方法检测砷对Sirt1、H3K9Ac 和H3K27Ac 在p16 和p53 基因启动子区富集程度的影响.转染Sirt1 表达质粒后,用RT-qPCR 检测其对p16 和p53 mRNA 表达的影响,转染Sirt1 siRNA 降低Sirt1 表达后,观察其对砷调节p16 和p53 表达作用的影响.结果 用0.2μ mol/L 砷处理48h 对L-02 细胞的促增殖作用最强,且此时,G1 期细胞所占比例显著低于对照组,而S 期细胞所占比例显著高于对照组(p 均＜0.05).无机砷处理降低了p16 和 p53mRNA 表达量,且明显降低H3K9Ac 和 H3K27Ac 在这两种基因启动子区的富集程度(p 均＜0.05).无机砷处理不仅增加Sirt1 mRNA 和蛋白水平的表达量,且增加细胞核中Sirt1 含量和其在p16 和p53 基因启动子区的富集程度(p 均＜0.05).转染Sirt1 高表达质粒增加L-02 细胞中Sirt1mRNA 表达量,却显著降低了p16 和 p53 mRNA 表达量(p 均＜0.05).用Sirt1 siRNA 降低L-02细胞中Sirt1 mRNA 表达量后,p16 和 p53mRNA 表达量显著增加(p 均＜0.05).在Sirt1 siRNA与砷联合组中,Sirt1 mRNA 表达量低于砷单独处理组,而p16 和p53 mRNA 表达量显著高于砷单独处理组(p＜0.05).结论 低剂量无机砷可能通过诱导Sirt1 表达,来抑制 p16 和 p53 表达,进而促进人正常肝细胞L-02 增殖.
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