基于错配特异性内切酶的基因合成错误修复技术

来源 :第七届中国工业生物技术发展高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lkks06
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  近年来,合成生物学的快速发展对基因合成技术提出了空前需求。而人工合成基因的高错误率成为阻碍基因合成技术发展的主要瓶颈之一,主要体现在人工修复或筛分过程费时费力、产物收率低及后续测序费用高昂等方面。本课题组致力于基因合成错误修复技术的研究,特别是与芯片基因合成技术兼容的错误修复体系的开发,并采用基于错配特异性内切酶的组合酶体系获得了初步成果。在该体系中,错配特异性内切酶识别错配碱基并切断其磷酸二酯键,使错配碱基暴露于DNA链的3’端,被具有3’→ 5’外切酶活性的核酸酶切除,最后通过重叠延伸PCR将基因重新组装完整。此方法具有高保真度,适用于碱基插入、缺失、置换等各种错配类型,并可重复进行以提高修复效率。对于片段较长、错误率较高的基因合成,此方法比已报道的其它错误修复方法具有明显的优势,不仅节省了大量的时间和成本,而且修复效率大大提高。
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