【摘 要】
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对虾白斑症病毒(WSSV)病的频繁发生制约了对虾养殖业的持续健康发展,研发实用化的WSSV快速检测诊断技术对预防疾病暴发具有重要意义.通过制备特异性抗WSSV的单克隆抗体和
【机 构】
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中国海洋大学水产学院,山东青岛266003
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对虾白斑症病毒(WSSV)病的频繁发生制约了对虾养殖业的持续健康发展,研发实用化的WSSV快速检测诊断技术对预防疾病暴发具有重要意义.通过制备特异性抗WSSV的单克隆抗体和多克隆抗体,利用蛋白芯片技术制备了WSSV检测免疫芯片,检测限达25ng/mL,实现了WSSV多样品高通量平行检测,在0.62～9.9μg/mL范围内可定量检测.采用胶体金免疫层析原理制备了对虾WSSV胶体金快速检测试纸,对影响试纸条检测灵敏度的金标抗体、检测线抗体等关键因素进行了优化,制备的试纸条灵敏度为117.2 ng/mL,5min内得到肉眼直视检测结果；使用该试纸条对人工感染WSSV鳌虾(Procambarus clarkii)的鳃、肠、心脏、性腺、肌肉、肝胰腺、血淋巴等组织进行了跟踪检测,发现在感染后12 h时,肠最早检测为WSSV阳性；24h时,鳃、血淋巴、肠、心脏、性腺、肝胰腺的检测结果为阳性,肌肉为阴性；36h时,各组织均检测为阳性.在该WSSV定性检测试纸的基础上,研究了检测线数量、排列及检测抗体浓度配比与WSSV定量检测,制各了WSSV相对定量快速检测试纸,可在78 1ng/mL～12.5μg/mL病毒浓度范围内定量检测WSSV.
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