论文部分内容阅读
目的:将甲胎蛋白(AFP)基因的增强子和磷酸甘油酸激酶(pgk)基因的启动子组合形成的肝癌组织特异性AFpg启动子.构建由AFpg启动子调控的蛋白磷酸酶2A催化性C亚基α亚型显性负性突变体(DN-PP2Acα)表达载体,研究其用于肝癌治疗的特异性和有效性.方法:采用定点突变将野生型PP2Acα突变为DN-PP2Acα.AFP增强子和pgk启动子克隆自肝癌细胞系HepG2基因组DNA，构入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中组合成AFpg启动子。荧光素酶报告基因实验检测AFpg启动子的转录活性。将pGL3-Basic-AFpg载体中的荧光素酶表达序列替换为DN-PP2Aca表达序列，获得AFpg启动子调控的DN-PP2Aca表达载体。MTT检测该载体对细胞活力影响。结果:AFpg启动子在表达AFP的细胞中具有高转录活性，AFpg启动子调控的DN-PP2Aca表达载体可特异性地抑制AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2的生长，而对不表达AFP的正常肝细胞L-02和肝癌细胞SK-HEP-I的生长无明显影响。结论:AFP增强子/pgk启动子调控的DN-PP2Aca表达载体特异性地作用于表达AFP的肝癌细胞，可用于肝癌组织特异性基因治疗。