【摘 要】
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背景:卡那霉素(Kanamycin,KAN)在本质上是一种蛋白质生物合成抑制剂,被广泛添加在兽药和饲料中,用于治疗猪的胃肠道和呼吸感染。但卡那霉素在动物体内的残留可能对人类的健康
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背景:卡那霉素(Kanamycin,KAN)在本质上是一种蛋白质生物合成抑制剂,被广泛添加在兽药和饲料中,用于治疗猪的胃肠道和呼吸感染。但卡那霉素在动物体内的残留可能对人类的健康造成严重的潜在威胁。卡那霉素分子量是582.58,属于半抗原物质,不具有免疫原性,因此将卡那霉素与大分子载体蛋白质进行偶联制备完全抗原,才具有免疫原性。目的 :在分析卡那霉素分子结构的基础上,合成具有强免疫原性的卡那霉素人工抗原并对其进行鉴定,为下一步的工作奠定基础。方法 :本研究用碳二亚胺法将卡那霉素分别偶联至载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)上,制备免疫原KAN-BSA和包被原KAN-OVA。用考马斯亮蓝蛋白浓度测定试剂盒对制备的完全抗原进行蛋白浓度的测定,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行鉴定。最后用KAN-BSA免疫4只6-8周龄的雌性Balb/c小鼠,分为30μg、50μg两个免疫剂量组,2只/组。免疫间隔3周,共免疫4次,四次免疫后断尾采血,用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测小鼠多抗血清效价。结果 :蛋白浓度测定试剂盒表明KAN-BSA的蛋白浓度为2.13mg/mL,KAN-OVA的蛋白浓度为1.31mg/mL,并通过电泳图谱观察到目的蛋白条带(KAN-BSA、KAN-OVA)较对照条带(BSA、OVA)在位置上有明显滞后性,可初步判定偶联成功。四免后尾部采血,间接ELISA法检测小鼠多抗血清效价,结果表明,高免疫剂量组的小鼠比低免疫剂量组的小鼠产生的多抗血清效价高,其中一只小鼠的效价最高可达1:1.28×10~4。结论 :本研究成功制备了KAN完全抗原KAN-BSA,为下一步制备亲和力高和特异性强的单克隆抗体奠定了坚实的基础。
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