【摘 要】
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以大白猪肺部组织为材料,分离Poly(A)+RNA,反转录合成单链及双链cDNA,经酶切成大小为200-500 bp的片段,将大白猪病变肺组织cDNA分成2组,分别与接头1、2连接,再与无病变肺组织
【机 构】
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中国农业科学院畜牧研究所,北京,100094
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以大白猪肺部组织为材料,分离Poly(A)+RNA,反转录合成单链及双链cDNA,经酶切成大小为200-500 bp的片段,将大白猪病变肺组织cDNA分成2组,分别与接头1、2连接,再与无病变肺组织cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增,将第2次抑制性PCR产物与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TOP 10感受态细胞进行文库扩增,构建了具有高消减效率的大白猪肺组织抗性相关cDNA文库.文库扩增后得到422个白色阳性克隆,随机挑选克隆进行PCR鉴定,插入片段主要分布在200～500 bp之间.文库的成功构建为进一步筛选、克隆与大白猪肺组织抗性相关的基因奠定了基础,对研究猪肺组织抗性的分子机制以及肺部疾病的综合防制具有重要意义.
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