【摘 要】
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目的：RNAi慢病毒载体对HepG2稳转细胞株增殖、迁移的影响.方法：运用病毒感染HepG2细胞获得稳定表达STAT6-ORF和STAT6-RNAi的细胞株,利用PCR和Western Blot的方法检测稳定细胞株中STAT6的表达丰度.CCK-8法检测稳转细胞株的细胞活性及Transwell实验检测稳转细胞迁移能力变化.结果：利用pLVTHm三质粒系统共转染293FT细胞进行慢病毒颗粒包装,通过
【出 处】
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第四届晋冀鲁豫肝病论坛暨2016年河南省医学会感染肝病学术年会
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目的：RNAi慢病毒载体对HepG2稳转细胞株增殖、迁移的影响.方法：运用病毒感染HepG2细胞获得稳定表达STAT6-ORF和STAT6-RNAi的细胞株,利用PCR和Western Blot的方法检测稳定细胞株中STAT6的表达丰度.CCK-8法检测稳转细胞株的细胞活性及Transwell实验检测稳转细胞迁移能力变化.结果：利用pLVTHm三质粒系统共转染293FT细胞进行慢病毒颗粒包装,通过载体报告子绿色荧光蛋白(GFP)判断,结果表明,三个载体转染的效率达到80％以上.病毒滴度测定,滴度分别为7.8× 107TU/mL,7.1×107 TU/mL和10.5×107 TU/mL.通过TET的筛选,成功获得了STAT6-ORF以及STAT6-RNAi的HepG2稳定表达细胞株,与对照组细胞相比,过表达STAT6-ORF转染的细胞增殖快(F=4.279,p=0.021),迁移率高；而STAT6-RNAi转染后,细胞增殖缓慢,随培养时间延长及传代(HepG2传到第三代细胞绝大部分细胞已经死亡),细胞逐渐崩解、漂浮死亡,细胞活性显著降低(F=290.114,p＜0.001),迁移能力显著下降.结论：本研究中构建的STAT6-RNAi和STAT6-ORF稳定株,方便于后期建立动物模型,进行裸鼠成瘤实验,体内验证STAT6的生物学功能,证实该基因的临床意义.在此基础上,便于进一步研究STAT6促进肝癌细胞增殖及迁移的分子机制.
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