【摘 要】
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目的 α-synuclein是帕金森病人路易小体的主要组成成分,并且在家族性帕金森病人中发现存在该蛋白的基因突变,说明α-synuclein与帕金森病密切相关.研究发现,路易小体中
【机 构】
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中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所,北京100050
【出 处】
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中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五届会员代表大会
论文部分内容阅读
目的 α-synuclein是帕金森病人路易小体的主要组成成分,并且在家族性帕金森病人中发现存在该蛋白的基因突变,说明α-synuclein与帕金森病密切相关.研究发现,路易小体中存在α-synuclein C端截短体,但其对细胞的作用机制尚不明确.杀虫剂鱼藤酮可能是诱发帕金森病的一种环境毒剂,它能导致线粒体功能障碍,增强细胞氧化应激,并且研究认为氧化应激也促进了帕金森病的发病.α-synuclein98是最近发现的一种C端截短体,本实验通过在PC12细胞中过表达α-synuclein98蛋白,研究该截短体对PC12细胞的毒性作用及过表达α-synuclein98蛋白的PC12细胞对鱼藤酮敏感性的变化.方法 通过PCR方法获得α-synuclein全长和98的基因片段,克隆到D sRe d-N1载体并转染PC12细胞,G418筛选稳定细胞株,RT-PCR与Western Blotting验证细胞稳定表达α-synuclein全长和98截短体；MTT法测定细胞活力；活性氧检测试剂盒和脂质氧化试剂盒测定胞内ROS和MDA水平.结果 (1)获得稳定表达α-synuclein全长和98截短体的PC12细胞株.(2) MTT结果表明在没有鱼藤酮刺激的条件下,过表达α-synuclein98对PC12细胞活力没有明显抑制作用(对照组的95％).(3)过表达α-synuclein98 PC12细胞内ROS与MDA水平相比对照组分别提高了26.5％和49.8％ (P＜0.05),而过表达全长α-synuclein的分别提高了5.6％与15.6％.(4)在0.5、1、2、5μM鱼藤酮刺激24 h后,过表达α-synuclein98的细胞活力明显降低(P＜0.05),并呈浓度依赖性.结论 过表达α-synuclein98能增加PC12细胞氧化应激水平,明显增强细胞对鱼藤酮的敏感性,导致细胞活力下降.
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