【摘 要】
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本研究利用口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的GP5和M蛋白编码基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,通过一次转录和翻译,可以同时实现两个蛋白的表达,以发挥GP5蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势作用。分别利用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot等方法,对获得的重组腺病毒(rAd-GP5-2A-M)进
【机 构】
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浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,杭州,310021 西北农林科技大学动医学院,杨凌712100
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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本研究利用口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的GP5和M蛋白编码基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,通过一次转录和翻译,可以同时实现两个蛋白的表达,以发挥GP5蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势作用。分别利用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot等方法,对获得的重组腺病毒(rAd-GP5-2A-M)进行检测,结果均证明GP5-2A-M蛋白不仅获得了正确表达,而且能自我裂解为GP5和M蛋白。上述研究表明,在GP5和M蛋白之间插入具有自我裂解功能的FMDV2A策略是切实可行的,并为PRRSV多个蛋白的共表达奠定了基础,也为其它病毒的基因工程疫苗研制提供了全新的思路。
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根据PRRSVVR-2332毒株核苷酸序列,设计针对GP5基因的特异引物,以PRRSVJL/07/SW毒株细胞培养物为模板,利用RT-PCR方法,成功的扩增出GP5基因,将该基因与真核表达载体pCI-neo连接,转染Marc-145细胞中,用间接免疫荧光试验、SDS-PAGE和western-blot鉴定目的蛋白的表达。结果：RT-PCR分别扩增出GP5基因大小与预期一致,与国际PRRSV美洲型V
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