【摘 要】
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目的：将乙型脑炎病毒E蛋白基因克隆至pET-28a(+)表达载体，构建原核表达质粒pET-28a(+)/E，并使该基因在E.coli中高效表达，为进一步研制乙脑早期诊断试剂奠定基础。方法：以乙型脑炎病毒疫苗株全基因序列为模板设计引物，通过RT-PCR 方法扩增目的片段，将其克隆到pMD18-T载体中，得到克隆质粒pMD18-T/E。pMD18-T/E经Xho I和EcoR I酶切，测序后连接pET
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,吉林 长春 130062 吉林大学畜牧兽医学院,吉林 长春 130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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目的：将乙型脑炎病毒E蛋白基因克隆至pET-28a(+)表达载体，构建原核表达质粒pET-28a(+)/E，并使该基因在E.coli中高效表达，为进一步研制乙脑早期诊断试剂奠定基础。
方法：以乙型脑炎病毒疫苗株全基因序列为模板设计引物，通过RT-PCR 方法扩增目的片段，将其克隆到pMD18-T载体中，得到克隆质粒pMD18-T/E。pMD18-T/E经Xho I和EcoR I酶切，测序后连接pET-28a(+)载体，构建了重组原核表达质粒pET-28a(+)/E。转化至大肠杆菌BL21(DE3)后，利用IPTG诱导获得高效表达。
结果：扩增出了1500bp的基因片段，与预期大小一致，测序后经Blast验证与已发表乙型脑炎病毒SAl4-14-2株E蛋白基因序列同源性为98％，成功克隆至表达载体pET-28a(+)并获得高效表达，表达产物分子量约为53kDa。
结论：该表达产物的稳定高效表达为乙脑的诊断试剂开发提供了依据。
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