【摘 要】
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探讨α-突触核蛋白在人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞中定位过表达的影响.研究应用PLVU-SNCA-NES(NLS)-2A-EGFP重组慢病毒载体感染SH-SY5Y细胞,通过观察绿色荧光蛋白(EGFP)检测
【机 构】
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江苏大学药学院,镇江,212013
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探讨α-突触核蛋白在人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞中定位过表达的影响.研究应用PLVU-SNCA-NES(NLS)-2A-EGFP重组慢病毒载体感染SH-SY5Y细胞,通过观察绿色荧光蛋白(EGFP)检测目的基因在细胞中的表达情况.形态观察与MTT检测相结合,分析胞质和核定位α-突触核蛋白过表达对SH-SY5Y细胞增殖的影响,同时测定鱼藤酮、H2O2对胞质和核定位α-突触核蛋白过表达SH-SY5Y细胞活性的影响.MitoTracker染色法测定胞质和核定位α-突触核蛋白过表达的SHSY5Y细胞中线粒体数目的变化.结果发现,α-突触核蛋白胞质定位过表达使得SH-SY5Y细胞培养96h时活性显著增强,24h、48h、96h时细胞中线粒体的数目显著增加,增长比率分别为91.18％、41.15％、50.21％;α-突触核蛋白核定位过表达的SH-SY5Y细胞相对正常细胞表现出较低的细胞活性,在培养48h、72h后细胞存活率显著下降.400nmol/L鱼藤酮损伤24h后,α突触核蛋白核定位过表达的SH-SYSY细胞活性显著高于正常细胞鱼藤酮损伤组.50～800μmol/LH2O2处理条件下,α-突触核蛋白的定位过表达对SH-SY5Y细胞活性的影响并不显著.研究结果表明α-突触核蛋白胞质定位过表达表现出一定的神经保护作用,α-突触核蛋白核定位过表达也能使SH-SY5Y细胞的活性发生改变.
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