【摘 要】
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本试验以犬贾第虫为研究对象,用改良TYI-S-33培养基对犬贾第虫滋养体进行体外纯培养,提取犬贾第虫滋养体总RNA,合成cDNA,进行cDNA纯化后,连接线性酵母载体,构建犬贾第虫
【机 构】
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吉林大学动物医学学院,长春,130062
【出 处】
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中国动物学会原生动物学分会第十八次学术讨论会
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本试验以犬贾第虫为研究对象,用改良TYI-S-33培养基对犬贾第虫滋养体进行体外纯培养,提取犬贾第虫滋养体总RNA,合成cDNA,进行cDNA纯化后,连接线性酵母载体,构建犬贾第虫滋养体酵母双杂交cDNA文库,文库滴度为2.3× 107cfu/ml,文库库容为5.5×109cfu,重组克隆阳性率≥85％.通过RT-PCR技术和分子克隆技术构建诱饵载体pGBKT7-GcTRBD,转化AH109酵母菌,进行诱饵蛋白自激活作用与毒性检测.然后进行文库宿主菌和诱饵菌株的杂交融合,在酵母营养缺陷工作平板上培养,阳性克隆经a-半乳糖苷酶试验鉴定,利用酵母系统筛选获得1个TRBD互作蛋白一复制因子亚基1(RFC1).通过pull-down试验和Co-IP试验发现犬贾第虫TERT保守结构域TRBD结构蛋白与RFC1蛋白存在相互作用.为下一步研究RFC1蛋白功能及端粒酶互作蛋白的调节机制奠定了基础.
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