【摘 要】
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蓝藻的生物钟基因(Kai基因)簇包括3种基因:KoiA, KaiB和KaiC，它们组成了生物钟的中央振荡器部分。本文克隆KaiB基因是为了用反向遗传学研究其功能。基因克隆从设计和合成相应的引物开始。接着提取聚球藻7942的基因组DNA作为模板；用PCR扩增KaiB；与质粒PUC19相连，转化大肠杆菌DHSa,请公司测序；把测得结果经NCBI用Blast比对，证明与GenBank中聚球藻7942的同
【机 构】
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天津科技大学海洋学院 天津 300457 哈尔滨工业大学海洋学院 威海 254209 首都师范大学生命科学院 北京 100037 中国科学院植物研究所 北京 100093
【出 处】
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庆祝中国藻类学会成立30周年暨第十五次学术讨论会
论文部分内容阅读
蓝藻的生物钟基因(Kai基因)簇包括3种基因:KoiA, KaiB和KaiC，它们组成了生物钟的中央振荡器部分。本文克隆KaiB基因是为了用反向遗传学研究其功能。基因克隆从设计和合成相应的引物开始。接着提取聚球藻7942的基因组DNA作为模板；用PCR扩增KaiB；与质粒PUC19相连，转化大肠杆菌DHSa,请公司测序；把测得结果经NCBI用Blast比对，证明与GenBank中聚球藻7942的同源性为100[％]。这说明，正确地克隆了KaiB，这个基因含309个碱基。把克隆到得KaiB基因与T载体相连;然后用BamH I和Sal I双酶切克隆载体pMD-KaiB和穿梭表达载体pRL-489载体大片段；用T4DNA连接酶连接这两个片段；转化大肠杆菌DHSa，涂板后用卡那霉素筛选阳性克隆：从大肠杆菌转化子中提取PRL489-KaiB载体，做酶切和电泳，鉴定KaiB基因的插入，证明敲除载体批pRL489-KaiB已构建好。
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研究发现细胞核增殖抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA)与细胞DNA合成关系密切，在细胞增殖的启动上起重要作用，还参与了许多细胞重要事件。本研究克隆了Alexandrium catenella qdl和A. catenella qd2 pcna基因部分cDNA序列，分析表明pcna基因在真核生物间是高度保守的。通过Southern杂交得到pcna基
由于偶而发生的一些水产食品中毒事件，以及在1986年发生的西施舌贝引起消费者集体中毒，让大家开始了一些相关赤潮毒素的研究工作，从台湾相关的水域包括优养化的水库，淡水、海水养殖池，以及珊瑚礁沿岸的大型海藻上，单离水华浮游藻类与或栖性附生藻类，建立藻株培养，并从中分离有毒藻株所含毒素，以为毒性监测所需分析材料。并且利用这些有毒、无毒藻株与纯质毒素于生态毒理学相关研究。本研究使用的藻株包括亚历山大微细藻
蓝藻是至今已证明具有生物钟，这种内源计时系统的最简单生物.即使一天内细胞分裂速度超过一次，生理节律仍然以近似昼夜周期进行。蓝藻极为简单的结构却具有极为多样的代谢途径，如光合放氧和固碳，呼吸吸氧和放CO2，固氮和产氢等，有些相互促进，也有些相互干扰。为了协调这些多途径代谢，除了有相应结构外，生物节律的调节也是一个重要方面。已经证明，蓝藻的生物钟周期与环境光暗周期接近时，细胞具有更强的竞争优势。Kai
本实验室已采集并分离纯培养中国十几个省市的六种主要丝状水华蓝藻共750余株。利用特异性引物对这些蓝藻进行初检的结果显示:其中62[％]仅检测到gvpC28,38[％]同时检测到gvpC28和gvpG20。具体分布为：134株浮丝藻中有31[％]仅检测到gvpC28，69[％]同时检测到gvpC28和gvpG20；108株拉式拟浮丝藻中有44[％]仅检测到gvpC28，56[％]同时检测到gvpC2
蓝藻水华在淡水湖泊中随着富营养化而日益普遍。高通量检测蓝藻毒素的方法主要有酶联免疫法(ELISA)、蛋白磷酸酶法(PPIA )、高效液相色谱(HPLC)等。这些方法都是测定毒素多肽，在制备样品上操作繁琐、保持其活性也要求较高。近年来发展起来的DNA检测方法可能有其优点。测定毒素蛋白的长处是可以分辨不同类型的微囊藻毒素。PCR技术有无可能呢，本研究作了探索。选择了微囊藻毒素合成基因中3个：mcyB、
考虑到虽然铜绿微囊藻的基因全序列已测完，但是有关转基因技术尚未建立，作者想用模式生物聚球藻7942来模拟。第一步必须先观察真核藻能否化感抑制聚球藻7942，在不同光周期下化感抑制的模式是否相似。对铜绿微囊藻做了3种处理:1纯培养在BG-11液中作对照；2与真核藻共培养在BG-11液中；3纯培养在真核藻培养液的滤液中。结果表明:真核藻与聚球藻共同培养在BG-11液中，聚球藻7942只在细胞较少的情况
目前的发现对有效而安全地控制蓝藻水华非常有用。植物提取物对蓝藻的控制作用快速而确切，特别是在细菌辅助降解下，能够降低外源藻毒素含量。同时，为了更有效更安全地控制蓝藻水生长，实验还试验了在不同条件下藻类对该植物提取物的不同敏感度。在指数增长期，2PPm最佳浓度的提取物表现了很好的藻类生长和毒素分泌抑制效果，特别是在有菌环境中:在平台期，推荐4ppm的提取物浓度是能最大促进藻密度下降和外源毒素含量的降
本文主要研究碳酸氢钠((NaHC03)和醋酸钠(NaAC)对鱼腥藻IB02的影响。结果表明，lOmM的NaHC03对转基因工程蓝藻生长的促进效果最为明显，稳定期细胞密度达到对照组的1.69倍，比NaAC的促进效果明显；在对数生长期一，添加6mM的NaHC03后，异形胞的频率从3.7[％]增长到5.5[％]，添加IOmM的NaAC则使异形胞的频率从3.7[％]增长到5.3[％]，相反对生长促进效果最
本文克隆的kaiC基因是为了构建敲除载体，反过来敲除聚球藻7942的kaiC基因，以探索kaiC蛋白可能的功能。为了从聚球藻7942中克隆kaiC基因，按已知碱基序列中保守部分设计引物，并送有关公司合成引物。接着以聚球藻7942基因组DNA为模版，用PCR技术克隆出kaiC基因。把基因连在pUC 19载体上测序鉴定后，把kaiC基因片段正连和反连到质粒pRL-489上PbsbA启动子下游、BamH