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目的:了解雌激素对大鼠ADSCs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达及蛋白合成的影响,为ADSCs联合雌激素用于治疗绝经后POP提供实验数据.
方法:以终浓度分别为10-7、10-8、10-9、10-10、10-11M的17-β雌二醇加入第3代大鼠ADSCs中进行体外培养,用MTT法检测细胞的增殖能力,并与空白对照组(17-β雌二醇的浓度为0M)进行比较;分别在培养1周、2周、3周后,采用荧光定量PCR相对定量的方法及蛋白质免疫印迹(western blot)法分别检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达及蛋白合成的变化.
结果:MTT法检测结果显示各组细胞的生长曲线均呈"S"型,在不同浓度的17-β雌二醇刺激下,大鼠第3代ADSCs均表现为增殖能力增强,当17-β雌二醇的浓度为10-9 mol/L时,大鼠ADSCs的增殖指数上升更明显,与对照组比较有明显的统计学意义,P＜0.05;不同浓度的17β-雌二醇对大鼠ADSCsⅠ型胶原蛋白mRNA的表达及蛋白合成有促进作用,当17β-雌二醇的浓度为10-9 mol/L时,大鼠ADSCs的Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达量1周时约为对照组的1.4倍,2周时约为2.7倍,差别具有统计学意义,P＜0.05.大鼠ADSCs的Ⅰ型胶原蛋白的灰度值与β-actin的比值1周时为1.2351±0.0148,2周时为1.3934±0.3807,而对照组中1周时为0.7484±0.0373,2周时为1.0499±0.2822,差别具有统计学意义,P＜0.05.不同浓度的17β-雌二醇对大鼠ADSCs Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达及蛋白合成有促进作用,当17β-雌二醇的浓度为10-9mol/L时,大鼠ADSCs的Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达量1周时约为对照组的1.8倍,2周时约为3.4倍,差别具有统计学意义,P＜0.05.大鼠ADSCs的Ⅲ型胶原蛋白的灰度值与β-actin的比值1周时为0.5959±0.0839,2周时为0.7948±0.0241,而对照组中1周时为0.4528±0.1177,2周时为0.5215±0.1246,差别具有统计学意义,P＜0.05.
结论:生理浓度的17β-雌二醇能够显著促进大鼠ADSCs的增殖,增加Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的mRNA的表达与蛋白合成,推测ADSCs联合应用雌激素可能更有利于盆底局部胶原蛋白的合成,有望作为绝经后POP患者的非手术治疗的方法之一.