【摘 要】
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目的：广泛存在于蔬菜水果中的3,6-二羟黄酮具有抑制乳腺癌的效应,但是其对乳腺癌细胞EMT 的效应尚不清楚,本文旨在探讨3,6-DHF对乳腺癌EMT的影响,为乳腺癌的防治工作提供
【机 构】
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第三军医大学营养与食品安全研究中心,重庆市医学营养研究中心,重庆市营养与食品安全重点实验室,重庆400038
【出 处】
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2017中国营养医学发展论坛暨全军营养医学大会
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目的：广泛存在于蔬菜水果中的3,6-二羟黄酮具有抑制乳腺癌的效应,但是其对乳腺癌细胞EMT 的效应尚不清楚,本文旨在探讨3,6-DHF对乳腺癌EMT的影响,为乳腺癌的防治工作提供相关依据.方法：本课题通过WB和免疫荧光技术分析3,6-DHF对乳腺癌细胞EMT 标志蛋白及Notch信号通路相关蛋白的表达的影响.使用转染荧光报告基因的Luc-MDA-MB-231细胞构建裸鼠移植瘤模型,利用活体成像仪,定量分析3,6-DHF对移植瘤荧光量表达的抑制效应.通过免疫组化技术分析3,6-DHF对乳腺移植瘤EMT 标志蛋白和Notch通路相关蛋白表达的影响.采用ALDEFLOUR分析法、微球体成球实验和CCK-8法分析3,6-DHF 对BCSCs的抑制效应.利用Transwell侵袭和迁移实验、细胞划痕实验明确3,6-DHF抑制体外乳腺癌细胞的转移能力.利用Luc-MDA-MB-231细胞,构建裸鼠体内肺转移模型,通过活体成像仪和HE染色观察3,6-DHF膳食干预对体内乳腺癌细胞的转移能力的抑制效应.采用转染技术进一步明确3,6-DHF通过调控Notch信号通路进而抑制乳腺癌发生EMT的作用.结果：WB结果显示,3,6-DHF可显著抑制EMT标志蛋白N-cadherin、Twist、Snail和Slug的表达,增强E-cadherin的表达.裸鼠移植瘤模型结果显示3,6-DHF抑制裸鼠移植瘤荧光量的表达,流式细胞结果显示,3,6-DHF浓度增加,ALDH+细胞的比例逐渐下降.微球体成球实验结果显示3,6-DHF可以明显抑制乳腺癌细胞的成球能力.Transwell侵袭和迁移实验表明,随3,6-DHF浓度的增高,穿过Transwell 小室的乳腺癌细胞数量逐渐降低.我们进一步通过裸鼠肺转移模型结果显示,3,6-DHF可显著抑制乳腺癌细胞发生肺转移.WB和免疫组化技术检测结果显示,3,6-DHF可显著降低Notch1、NICD和Hes-1的表达.质粒转染过表达Notch基因后,Notch1过表达可降低3,6-DHF对EMT标志蛋白Snail、Twist和Slug的抑制效应,减弱3,6-DHF对E-cadherin蛋白的上调作用.结论：3,6-DHF可在体内外对乳腺癌细胞EMT的发生和BCSCs的形成具有显著的抑制效应,抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力,Notch信号通路在3,6-DHF抑制乳腺癌细胞发生EMT中发挥了重要的作用.结果表明为乳腺癌的防治工作提供了新的策略.
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