【摘 要】
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目的 构建含有趋化因子受体--7(CCR7)基因的重组慢病毒,感染树突细胞系DC2.4,观察对DC24免疫功能和迁移功能的影响.方法 用含10％血清的RPMll640培养树突细胞系DC2.4,构建带有绿色荧光蛋白的空载慢病毒和带有上调CCR7基因的慢病毒,分别感染DC2.4,实验对象分为三组：未处理DC2.4(DC24)、绿色荧光蛋白空载慢病毒感染DC2.4(GFP-DC24)}FI带有CCR7上
【机 构】
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400038 重庆第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
【出 处】
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第十届全国烧伤救治专题研讨会暨福建省第八次烧伤外科学术研讨会
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目的 构建含有趋化因子受体--7(CCR7)基因的重组慢病毒,感染树突细胞系DC2.4,观察对DC24免疫功能和迁移功能的影响.方法 用含10％血清的RPMll640培养树突细胞系DC2.4,构建带有绿色荧光蛋白的空载慢病毒和带有上调CCR7基因的慢病毒,分别感染DC2.4,实验对象分为三组：未处理DC2.4(DC24)、绿色荧光蛋白空载慢病毒感染DC2.4(GFP-DC24)}FI带有CCR7上升基因的DC2.4(CCR7-DC2.4).用流式细胞术(FCM)、western blot、激光共聚焦检测各组细胞表面分子CD80、CD86、CCR7的表达.混合淋巴细胞反应检测各组细胞免疫功能的差别.体外趋化实验检测其迁移功能的变化.结果 构建获得稳定的慢病毒,感染DC24的效率达到87％左右.流式峰图显示CCR7-DC2.4组与另外两组细胞比较,MHC Ⅱ、CD80及CD86的表达均无明显差异；蛋白电泳结果 显示共刺激分子CD80无明显变化(F=0.07,P＞0.05),CD86三组无明显差异(F=1.14,P＞0.05),但CCR7-DC24组CCR7蛋白表达量(45.1±21)明显高于DC2.4(25.32±1.44)和GFP-DC2.4(28.6±0.9)(F=162.90.P＜0.05).而DC2.4组和DC2.4-GFP组无明显差别(F=2.21,P＞0.05).激光共聚焦显示转染病毒组(CCR7-DC2.4)较对照组CCR7荧光强度明显升高.趋化实验显示CCR7-DC2.4在CCLl9作用下体外趋化迁移率(41.0±2％)明显高于DC2.4(6.0±0.5％)和GFP-DC2.4(6.8±0.3％)(F=84.21,P＜0.05),而DC2.4和GFP-DC2.4无明显差别(F=0.45,P＞0.05).混合淋巴细胞反应显示DC2.4、GFP-DC24和CCR7-DC2.4对小鼠脾脏T细胞的刺激能力分别为4.32±012,4.80±0.29,5.05±0.05,免疫功能无明显差别(F=2.122.P＞0.05).结论 成功构建了含有CCR7的慢病毒并高效转染DC2.4,使细胞高表达CCR7,对CCLl9有较高的趋化性,并且慢病毒转染对DC2.4免疫功能没有明显影响.
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