【摘 要】
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目的对结核分枝杆菌14 000基因抗原进行克隆表达及纯化,为结核病的诊断、预防及其免疫学特性的研究提供方便。方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)
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目的对结核分枝杆菌14 000基因抗原进行克隆表达及纯化,为结核病的诊断、预防及其免疫学特性的研究提供方便。方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)方法获得目的基因构建大肠杆菌高效表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白抗原的相对分子质量大小及表达形式;用GSTrap FF亲和层析柱纯化重组蛋白;酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析重组蛋白的免疫原性。结果构建了具有正确基因序列的重组表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,重组蛋白占菌体总蛋白的20％,Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。 ELISA分析中,该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清。结论 14 000重组抗原具备良好的抗原性与特异性,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及抗原、抗体的大规模制备打下基础。
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