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目的:肿瘤转移是恶性肿瘤的主要特征,是引起癌症患者死亡的首要因素.中药藤黄和同属植物中所含的藤黄酸及其类似物具有显著的抗肿瘤活性,其抗肿瘤机制的多样性也越来越受到关注.利用细胞划痕(wound healing assay)实验的筛选平台,对藤黄属植物化合物库开展抗肿瘤药物的筛选,试图发现有抑制肿瘤转移的新化合物,并深入探讨其作用机制.
方法:(1)运用划痕实验平台，使用倒置显微镜观察细胞转移现象;(2)采用Transwell和Matrigel方法研究oblongifolin C是否抑制侵袭和侵润;(3)应用Ettan 2D蛋白质双向电泳系统，对oblongifolin C处理前后的细胞裂解液进行双向电泳，银染，扫描及数据处理，选取表达量差异超过3倍的蛋白质点，进行质谱分析，运用二维蛋白质结合质谱分析找到oblongifolin C的作用靶点之一角蛋白(keratin )18;(4)用荧光实时定量PCR和western blot进一步检验角蛋白18 mRNA表达量和蛋白质表达量;(S)用免疫染色观察蛋白的表达和定位;(6)用小千扰RNA (siRNA)敲除keratin 18，研究oblongifolin C是否抑制侵袭和侵润。
结果:发现藤黄属植物化合物库中化合物oblongifolin C能显著抑制人食管癌细胞Eca109, KYSE150以及人肝癌细胞HepG2的转移。为了对oblongifolin C进行深入的机制研究，我们运用蛋白质组技术检测oblongifolin C 24小时处理前后细胞蛋白质组的变化，二维蛋白质结合质谱显示oblongifolin C调节了40个蛋白质的表达量，其中包括了角蛋白18等与转移紧密相关的蛋白。荧光实时定量PCR进一步发现oblongifolin C能浓度以及时间依赖增加细胞内角蛋白18的mRNA水平。免疫染色和western blot验证了oblongifolin C能增加细胞内角蛋白18的蛋白表达量。还发现10M oblongifolin C可以有效的升高微管蛋白(-tubulin和一tubulin)的蛋白水平。运用siRNA，发现角蛋白18的降低可以促进食管癌肿瘤细胞转移，侵袭和侵润，并且抑制了oblongifolin C的抗肿瘤转移能力。这些结果提示oblongifolin C可能通过增加角蛋白18，增强了微管蛋白的聚合，从而抑制了肿瘤细胞的转移。
结论:oblongifolin C能抑制肿瘤细胞的转移，有望成为抗肿瘤转移药物的先导化合物。首次发现在食管癌细胞中角蛋白18的减少可以促进肿瘤转移;揭示了oblongifolin C可能的作用靶点之一角蛋白18，为抗肿瘤转移天然化合物的创新性研究提供理论基础。