【摘 要】
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目的 DNA编辑技术是基因靶向修饰技术研究热点,已广泛应用于生物医学和农业.然而,传统基因打靶技术存在效率低、成本高、工作量大等缺点,其应用受到了极大的限制.方法 利
【机 构】
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深圳华大基因研究院,深圳518083;深圳动物基因组辅助育种工程实验室,深圳518083深圳华大基因研究院,深圳518083;深圳华大方舟生物技术有限公司,深圳518083;深圳动物基因组辅助育种工程
【出 处】
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2014第十一届中国实验动物科学年会
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目的 DNA编辑技术是基因靶向修饰技术研究热点,已广泛应用于生物医学和农业.然而,传统基因打靶技术存在效率低、成本高、工作量大等缺点,其应用受到了极大的限制.方法 利用最近发展起来的新型人工核酸酶——转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALENs)介导的基因组定点修饰技术.结果 通过构建特异识别猪生长激素受体(GHR)基因的TALENs表达载体,共转染巴马胎猪成纤维细胞系,G418筛选获得2个双等位基因敲除的克隆细胞株,酶切鉴定基因修饰效率为46.2％.再以双等位基因敲除的克隆细胞株为核供体,利用手工克隆技术制备GHR-KO巴马猪克隆胚,第6d囊胚率高达43.5％,654枚体外发育的囊胚移植6头受体母猪,共获得10头存活GHR-KO巴马仔猪,其中7头为双等位基因敲除.体重检测结果显示,第20周龄的GHR-KO巴马猪体重仅为对照巴马猪的50％.结论 研究结果表明TALENs和手工克隆技术能够高效制备出基因敲除大动物.GHR-KO巴马猪的成功制备为研究猪GHR基因生理功能以及人类侏儒症分子机理提供了重要模型,也证明该技术比传统基因打靶和克隆技术具备更简捷、快速、高效,更易于在生物医学和农业基因靶向修饰研究中推广.
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