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研究背景:目前,NK细胞的培养方法多种多样,细胞来源也多种多样,但因其培养过程繁琐、成本较高、细胞比例较低等因素限制了NK细胞的临床应用。如何获得高纯度、高效能的NK细胞,使其在体内持续扩增并产生抗肿瘤活性成为众多学者研究的热点。血液中心在获取洗涤红细胞等血液制品时,首先需要滤除掉白细胞,而这些被滤除的白细胞细胞数量大、功能活性强、无传染性病原体污染,本研究小组将其作为同种异体NK细胞的重要来源,经过体外培养用于治疗恶性肿瘤。目的:利用制备血液制品后滤除掉的白细胞体外诱导扩增NK细胞,对NK细胞的分离培养方法进行优化,为同种异体NK细胞的临床应用提供基础研究。方法:收集山西省血液中心2014年3月至2014年11月期间15例健康献血者,将制备血液制品后滤除白细胞回收,经梯度密度离心法获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),每份样本分为3组,A组:培养瓶预先包被CD3mA b;B组:培养瓶预先包被CD16mA b;C组:培养瓶预先包被CD16mA b和CD3mA b,相同培养条件下,加入相同无血清细胞培养液和细胞因子培养IL-2和IFN-γ诱导扩增。培养第0、8、12、17天显微镜观察细胞扩增倍数及流式细胞术检测细胞表型CD3-CD56+细胞比例变化,培养第0天和第17天检测NK细胞表面活化性受体的表达及细胞杀伤因子IFN-γ的分泌,培养第17天采用LDH释放法及流式细胞术检测NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用。结果:比较第0天CD3-CD56+细胞比例与诱导扩增第17天,A组[(15.19±12.22)%vs(16.34±10.51)%,P>0.05],B组[(83.63±10.63)%vs(16.34±10.51)%,P<0.05],C组[(49.40±12.64)%vs(16.34±10.51)%,P<0.05],A组差异无统计学意义,B组和C组CD3-CD56+细胞比例均较第0天显著增加,差异有统计学意义;第17天CD3-CD56+细胞比例B组比例显著高于A组和C组;三组NK细胞总数均大于109个;检测B组扩增第17天NK细胞表面活化性受体NKp30和NKp46表达比例较第0天均显著增高,NKG2D比例变化没有统计学意义;扩增后NK细胞对K562细胞具有较高杀伤活性。结论:制备血制品后滤除掉的白细胞经体外分离培养,可得到比例高达90%的NK细胞,其细胞总数大于109个,细胞活性增强,对肿瘤细胞具有较高的杀伤活性,达到临床治疗肿瘤的应用标准。