【摘 要】
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本实验的目的在于优化出东方百合的ISSR-PCR反应体系,为东方百合连锁遗传图谱的构建奠定技术基础.以东方百合法兰西的叶片为实验材料,DAN的提取采用了改良CTAB法,PeR扩增采用
【机 构】
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金陵科技学院园艺学院,南京,210038
【出 处】
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2011全国转基因新品种培育及产业化应用交流研讨会
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本实验的目的在于优化出东方百合的ISSR-PCR反应体系,为东方百合连锁遗传图谱的构建奠定技术基础.以东方百合法兰西的叶片为实验材料,DAN的提取采用了改良CTAB法,PeR扩增采用Touchdow-PCR程序.对影响ISSR-PCR反应的5个主要因素(模板DNA浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度)进行优化,建立了稳定的、重复性好的东方百合ISSR-PCR反应体系.20μL反应体系中,内含20ng模板DNA、2.0mmol/LMg2+、0.3mmol/L dNTPs、0.4μ mol/L引物、0.7UTaqDNA聚合酶.
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