碱性果胶酶PEL168的分子改造和在生物煮练中的应用

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本研究基于对PEL 168的结构分析,分别从增加盐桥,增加二硫键、增加局部结构的柔韧性等方面进行理性设计提高PEL168的比酶活和稳定性,但是大部分设计都造成了酶活的降低或者完全失活,只得到了一个比酶活提高1.32倍,pH稳定性提高的突变体V 132E。因此采用随机突变进行改造,利用error-prone PCR建立突变体文库,通过果胶底物平板初筛和%孔板复筛得到一个比酶活提高1.81倍的突变体K47E(640U/mg),在50℃时的半衰期也延长至4.5h。鉴于有利突变的累积效应,将突变位点V 132E和K47E进行组合,得到双突变体K47E/V 132E,其比酶活提高至873U/mg。
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